TCA-8113 人舌鳞癌细胞的应用

背景^[1-3]

TCA-8113人舌鳞癌细胞源自属于I级鳞癌(T2N1Amo，Ⅱ期)的原位舌癌的活组织检查切片。通过干贴壁方法建立于1987年，Tca-8113细胞传代时间为38小时。传代第3天有丝分裂指数为61%，移植效率为86%，软琼脂克隆生成率为53-57.7%。Tca-8113细胞经ATS处理后在ICR和C57B1小鼠中成瘤，电镜和组化特征与鳞癌相符。(STR检测位点同HELA)。

TCA-8113人舌鳞癌细胞

Tca-8113人舌鳞癌细胞培养操作

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

应用^[4][5]

用于那可丁联合奥沙利铂对人舌鳞癌Tca-8113细胞增殖及凋亡的影响

探究那可丁联合奥沙利铂对人舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞增殖及凋亡的影响,为临床上提高化疗对舌鳞癌的抑制效果提供新思路。

方法：用不同浓度的那可丁（0、5、10、20、40、60、80μM）处理舌鳞癌Tca-8113细胞24h,用CCK-8法检测那可丁对舌鳞癌细胞的增殖抑制作用,并计算半数抑制浓度（IC50）,选择接近IC50较小的药物浓度作为后续实验浓度;将体外培养的舌鳞癌Tca-8113细胞随机分为空白对照组、奥沙利铂组、那可丁组和联合用药组。

CCK-8法检测各组药物对舌鳞癌Tca-8113细胞的存活率;Hoechst33342染色荧光显微镜下观察细胞凋亡形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blotting法检测各组细胞中Bax、Bcl-2、PARP、cleaved Caspase-9和cleaved Caspase-3蛋白的表达水平。

结果：CCK-8法检测结果显示,随着那可丁药物浓度逐渐增大,细胞存活率逐渐减小（P<0.05）,呈现一定的浓度依赖性,并且联合用药组的舌鳞癌Tca-8113细胞存活率低于那可丁组和奥沙利铂组（P<0.05）,表明两药联合应用相较两药单独使用时,对舌鳞癌Tca-8113细胞的抑制作用增强;

Hoechst33342染色法结果显示:奥沙利铂组、那可丁组和联合用药组处理后均使舌鳞癌Tca-8113细胞发生凋亡特征性改变;

流式细胞术分析结果显示:联合用药组细胞凋亡率高于那可丁组和奥沙利铂组（P<0.05）,说明联合应用二者对诱导舌鳞癌Tca-8113细胞凋亡作用更显著;Western blotting法检测发现:与对照组相比,奥沙利铂组、那可丁组及联合用药组中Bax、PARP、cleaved Caspase-9和cleaved Caspase-3蛋白表达均升高,且联合用药组高于奥沙利铂组和那可丁组（P<0.05）,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达则相反（P<0.05）。

参考文献

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[2]Expression and clinical value of PD-L1 which is regulated by BRD4 in tongue squamous cell carcinoma.[J].Zhao Lu,Li Pengchong,Zhao Li,Wang Miao,Tong Dongdong,Meng Zilin,Zhang Qian,Li Qing,Zhang Fenghe.Journal of cellular biochemistry.2020(2)

[3]Targeting cellular microtubule by phytochemical apocynin exhibits autophagy-mediated apoptosis to inhibit lung carcinoma progression and tumorigenesis[J].Santanu Paul,Subhendu Chakrabarty,Suvranil Ghosh,Debasish Nag,Amlan Das,Debabrata Ghosh Dastidar,Moumita Dasgupta,Naibedya Dutta,Mandavi Kumari,Mahadeb Pal,Gopal Chakrabarti.Phytomedicine.2020(C)

[4]Ferulin C triggers potent PAK1 and p21-mediated anti-tumor effects in breast cancer by inhibiting Tubulin polymerization in vitro and in vivo[J].Dahong Yao,Dabo Pan,Yongqi Zhen,Jian Huang,Jinhui Wang,Jin Zhang,Zhendan He.Pharmacological Research.2020(C)

[5]翟江云.那可丁联合奥沙利铂对人舌鳞癌Tca-8113细胞增殖及凋亡的影响[D].锦州医科大学,2020.