NG108-15 [108CC15]小鼠神经细胞瘤与大鼠神经胶质瘤之融合细胞的应用

背景^[1-3]

NG108-15[108CC15]小鼠神经细胞瘤与大鼠神经胶质瘤之融合细胞,原名108CC15。这个细胞株由小鼠N18TG2神经母细胞瘤细胞和大鼠C6-BU-1神经胶质瘤细胞在失活仙台病毒存在下融合而成。

细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌,培养条件：DMEM（高糖）+10%FBS；37℃，5%CO2。

NG108-15[108CC15]小鼠神经细胞瘤与大鼠神经胶质瘤之融合细胞

培养方法：

收到NG108-15(小鼠神经细胞瘤与大鼠神经胶质瘤之融合细胞)后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml培养液继续培养。

如果细胞已长满（达80-90%）。即可进行传代，具体步骤如下：

1）弃去培养液，用PBS洗1-2次。

2）向瓶内加入1.0-2.0ml胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有6ml含10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。

3）加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新别的地方培养。4）传代比例：1:2-1:3

应用^[4][5]

用于二苯乙烯苷对冈田酸诱导的NG108-15细胞Tau蛋白异常磷酸化的干预作用与机制研究

采用冈田酸诱导的NG108-15细胞制备阿尔兹海默病细胞模型,通过检测二苯乙烯苷对诱导的NG108-15细胞中磷酸化的Tau蛋白以及相关磷酸激酶和磷酸酶、磷酸激酶调控因子表达的影响,探讨二苯乙烯苷对阿尔兹海默病细胞模型Tau蛋白磷酸化调控的影响及作用机制。

方法:采用MTT法观察TSG作用于冈田酸诱导的NG108-15细胞24 h时的增殖情况,选取合适的剂量作为造模浓度。取对数生长期的NG108-15细胞,分为正常组、模型组、TSG低、中、高剂量（50、100、200μmol/L）组。

利用AO/EB双荧光染色法检测TSG对细胞凋亡的影响;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测磷酸激酶蛋白CDK5、GSK3β、PKA、CK1、MAPK1、JNK,磷酸酶蛋白PP2A、PP2B、PP5和P35、Tau、P-Tau蛋白的表达。RT-PCR法检测CDK5、GSK3β、PP2A、PP2B mRNA的变化。

免疫荧光（Immunofluorescence）检测CDK5、GSK3β、PP2A、PP2B和Tau蛋白表达和分布。采用SPSS软件对正常组、模型组和高、中、低给药组的Tau、P-Tau蛋白,磷酸激酶CDK5、GSK3β、PKA、CK1、MAPK1、JNK蛋白、磷酸酶蛋白PP2A、PP2B、PP5和P35、Tau、P-Tau蛋白,磷酸激酶CDK5、GSK3β和磷酸酶蛋白PP2A、PP2B基因之间相关性进行分析。

结果:在MTT实验中,NG108-15细胞随OA浓度升高,存活率下降,当浓度为80nmol/L时,细胞存活率下降明显（P<0.01）,细胞衰老皱缩,细胞形态学发生改变,AO/BE荧光染色显示细胞有凋亡产生。

选取80nmol/L作为造模剂量,经给药后,TSG能够增强冈田酸诱导的NG108-15细胞的增殖能力,呈一定的剂量依赖;与模型组比较,TSG能抑制冈田酸对NG108-15细胞的衰老,提高细胞存活率（P<0.05）。

TSG对OA诱导的NG108-15细胞Tau蛋白磷酸化的影响Western blot实验中显示,与正常组相比,模型组中P-Tau的含量显著升高（P<0.01）,TSG给药后与模型组相比,中、高剂量组P-Tau含量下降（P<0.01或P<0.05）,免疫荧光检测中,与模型组相比,TSG给药组能减少Tau蛋白的聚集。结果提示,TSG降低OA诱导的NG108-15细胞的Tau磷酸化水平,减少Tau蛋白的聚集程度。

参考文献

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[5]谭俊杰.二苯乙烯苷对冈田酸诱导的NG108-15细胞Tau蛋白异常磷酸化的干预作用与机制研究[D].广西中医药大学,2019.