人肿瘤相关抗原(TAA)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

人肿瘤相关抗原(TAA)ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附法检测样本中肿瘤相关抗原(TAA)的浓度。

实验原理：往预先包被人肿瘤相关抗原(TAA)抗体的包被酶标板孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人肿瘤相关抗原(TAA)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人肿瘤相关抗原(TAA)

操作步骤：

1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。

2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。

3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5倍）；空白对照孔不加。

4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。

6、加酶标工作液：每孔加入酶标工作液50μL，空白对照孔不加。

7、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

8、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。

9、显色：每孔先加入显色剂A液50μL，再加入显色剂B液50μL，平板混匀器混匀30s（或用手轻轻震荡混匀30s），37℃避光显色15min。

10、终止：取出酶标板，每孔加终止液50μL，终止反应（颜色由蓝色立转黄色）。

11、测定：以空白孔调零，在终止后15分钟内，用450nm波长测量各孔的吸光值（OD值）。

12、计算：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。最终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

应用^[4][5]

用于六种肿瘤相关抗原自身抗体联合CA125检测对卵巢癌早期诊断的价值研究

通过间接酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测卵巢癌患者、卵巢良性上皮性肿瘤患者及正常对照组血清中六种肿瘤相关抗原（TAAs）Survivin,IMP1、CyclinD1、C-myc和CyclinE自身抗体,采用电化学发光免疫测定法（ECLIA）检测血清CA125的浓度,探讨六种TAAs抗体联合CA125检测对诊断早期卵巢癌的应用价值。

方法：研究对象选择卵巢肿瘤患者,经知情同意后收集血清立即冻存于—20。C冰箱,所有病例均经术后组织病理学证实。

①OC组78例,患者年龄23～79岁,包括浆液性囊腺癌63例、粘液性囊腺癌15例,FIGO临床分期I、II期（早期）28例,III、IV期（中晚期）50例。

②卵巢良性上皮性肿瘤组60例,患者年龄26-71岁。

③正常对照组血清100例,均采集于在郑州大学附属医院进行健康体检并证实无任何肿瘤相关疾患的健康女性,年龄21-65岁。

2方法采用间接酶联免疫吸附试验方法（ELISA）检测卵巢癌患者、卵巢良性上皮性肿瘤患者血清中6种肿瘤相关抗原（TAAs）P53、Survivin、IMP1、CyclinD1、C-myc和CyclinE的自身抗体表达,采用电化学发光免疫测定法（ECLIA）检测各组患者血清CA125的浓度,并以100例正常健康成人的血清为对照。

参考文献

[1]Polymorphisms and clinical outcome in recurrent ovarian cancer treated with cyclophosphamide and bevacizumab.Schultheis AM,Lurje G,Rhodes KE,et al.Clinical Cancer Research.2008

[2]Survival-adjusted health-related quality of life（HRQL）among patients with metastatic breast cancer receiving paclitaxel plus bevacizumab versus paclitaxel alone:results from Eastern Cooperative Oncology Group Study 2100（E2100）.Cella D,Wang M,Wagner L,et al.Breast Cancer Research and Treatment.2011

[3]Survivin initiates procapase 3/p21 complex formation as a result of interaction with CDK4 to resist Fas-mediated cell death.Suzuki A,Ito T,Kawano H,et al.Oncegene.2000

[4]CA125 reference values change in male and postmenopausal female subjects.Cartei G,Cartei F,Bertin M,et al.Clinical Chemistry and Laboratory Medicine.2012

[5]张兰兰.六种肿瘤相关抗原自身抗体联合CA125检测对卵巢癌早期诊断的价值[D].郑州大学,2013.