TE-1细胞的应用

背景^[1-3]

TE-1细胞是从一位患有食管鳞癌的男性患者分离建系的上皮细胞样食管癌细胞。

食道癌又叫食管癌，是发生在食管上皮组织的恶性肿瘤，占所有恶性肿瘤的2%。食道癌分早、中、期；通常治疗方法有手术治疗、化疗治疗、药物治疗；食道癌饮食以营养丰富、易于消化的食物为主。其发生病因与亚硝胺慢性刺激、炎症与创伤，遗传因素以及饮水、粮食和蔬菜中的微量元素含量有关。

TE-1细胞

传代方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.收到细胞后首次传代推荐将细胞悬液按1：2的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中，建议客户冻存一支备用，后续传代根据实际情况按1:2到1:5的比例进行。

应用^[4][5]

用于EGCG对人食管鳞癌TE-1细胞放疗增敏的作用及其机制研究

研究EGCG对人食管鳞癌TE-1细胞放射敏感性的影响,进而探究凋亡和自噬在其中发挥的作用,寻找促进食管鳞癌放射敏感性的方法。

方法：（1）四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测不同浓度（20、40、60、80μg/ml）的EGCG分别作用24、48、72小时对食管鳞癌TE-1细胞的生长抑制作用,确定EGCG最适工作浓度。80μg/ml EGCG与不同剂量的X射线（2、4、8Gy）联合应用对TE-1细胞的抑制效应,确定最适工作剂量。自噬抑制剂3-MA预处理食管鳞癌细胞TE-1后,检测EGCG和X射线联合处理对细胞增殖能力的影响。

（2）将实验分为空白对照组、EGCG组（培养液中EGCG终浓度为80μg/ml）、X射线组（放射剂量为4Gy）、EGCG+X射线组（培养液中EGCG终浓度80μg/ml+放射剂量4Gy）四组,克隆形成实验记录四组含大于50个细胞的克隆个数,流式细胞法检测四组细胞的凋亡率。X射线单独作用或与联合EGCG作用于TE-1细胞,通过克隆形成实验检测单纯放射组和放射联合EGCG组两组TE-1细胞放射敏感性的变化。

（3）免疫印迹法（Western blot法）检测不同处理组TE-1细胞中Cleaved caspase-3、Bcl-2、LC3-II、Belin1蛋白的相对表达情况,荧光倒置显微镜观察自噬小体荧光量的变化。

（4）自噬基因Beclin1小干扰RNA（siRNA-Beclin1）处理食管鳞癌细胞TE-1后,采用MTT法和Western blot法检测EGCG和X射线联合处理后TE-1细胞的增殖能力及LC3-II表达水平的变化。

参考文献

[1]Tea chemistry.Harbowy,M.E,Balentine,D.A.Critical Reviews in Food Science and Nutrition.1997

[2]Functional cloning of genes regulating apoptosis in neuronal cells.Visconti R,D‘Adamio L.Methods in Molecular Biology.2007

[3]Role of p53 and NF-kappa B in epigallocatechin-3-gallate-induced apoptosis of LNCa P cells.Hastak K,Gupta S N,Agarwal M K,et al.IEEE T Consum Electr.2008

[4]The unfolded protein response regulator GRP78/BiP as a novel target for increasing chemosensitivity in malignant gliomas.Pyrko Peter,Schnthal Axel H,Hofman Florence M,Chen Thomas C,Lee Amy S.Cancer Research.2007

[5]刘申吒.EGCG对人食管鳞癌TE-1细胞放疗增敏的作用及其机制研究[D].江苏大学,2016.