人胎盘滋养层细胞的应用

背景^[1-3]

人胎盘滋养层细胞分离自胎盘组织，采用胰蛋白酶-DNA酶联合消化法结合密度梯度离心法制备而来。细胞经Cytokeratin-7免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

人胎盘滋养层细胞

胎盘（placenta）是哺乳动物妊娠期间由胚胎的胚膜和母体子宫内膜联合长成的母子间交换物质的过渡性器官，由羊膜、叶状绒毛膜和底蜕膜构成。

胎儿在子宫中发育，依靠胎盘从母体取得营养，而双方保持相当的独立性。胎盘还产生多种维持妊娠的激素，是一个重要的内分泌器官。有些爬行类和鱼类也以胎生方式繁殖后代，胚胎生长出一些辅助结构如卵黄囊、鳃丝等与母体组织紧密结合，以达到母子间物质的交换，这样的结构称假胎盘。

绒毛膜是由滋养层和胚外中胚层的壁层构成。胚泡植入子宫内膜后，在胚泡表面形成许多绒毛样的突起，以细胞滋养层为中轴，外裹合体滋养层，称初级干绒毛。胚外中胚层长入初级干绒毛的中轴，使初级干绒毛变成了次级干绒毛。

当绒毛膜的胚外中胚层内形成血管网和结缔组织，并与胚体内的血管相通时，次级干绒毛改称三级干绒毛。三级干绒毛末端的细胞滋养层细胞形成细胞滋养层壳。随着胚胎发育，丛密绒毛膜与基蜕膜共同构成了胎盘，而平滑绒毛膜则和包蜕膜一起逐渐与壁蜕膜融合。

应用^[4][5]

用于MSX2对人胎盘滋养层细胞侵袭能力的影响及机理研究

以不同时期人胎盘绒毛组织及人滋养层细胞系作为研究对象,研究MSX2对人胎盘滋养层细胞侵袭行为的影响及其机制。

方法:1.用免疫组织化学方法检测MSX2在不同时期的人胎盘绒毛滋养层细胞的表达。

2. 用Western Blotting方法检测MSX2在HTR8/SVneo,JEG-3,JAR和BeWo四种人滋养层细胞中的表达。

3. 对人正常滋养层细胞系HTR8/SVneo转染MSX2过表达质粒或特异性的MSX2-si RNA后,运用细胞侵袭实验（Matrigel invasion assay）检测MSX2对滋养层细胞侵袭能力的影响,随后收集上清液和细胞,分别用明胶酶谱法和Western Blotting方法检测基质金属蛋白酶Pro-MMP-2,-9和MMP-2,-9的表达。

4. 在正常滋养层细胞系HTR8/SVneo及绒毛膜癌细胞系JEG-3中过表达或干扰MSX2后,收集细胞RNA或者蛋白,用qRT-PCR和（或）Western Blotting方法检测与EMT及侵袭相关因子E-cadherin,vimentin和β-catenin的表达。

5. 用免疫组织化学及Western Blotting方法对比检测MSX2在人正常足月胎盘和先兆子痫胎盘滋养层细胞中的表达。

结果:1.MSX2蛋白表达在整个妊娠时期人胎盘的细胞滋养层,合胞体滋养层和绒毛外滋养层细胞中,且在HTR8/SVneo,JEG-3,JAR和BeWo四种人滋养层细胞中也均有表达。

2. HTR8/SVneo细胞转染MSX2过表达质粒后,该细胞在体外的侵袭能力得到了提升（271±45vs.443±75,P<0.05）,并且伴随着基质金属酶-2（MMP-2）,vimentin和β-catenin的表达升高（P<0.05）。

转染MSX2-siRNA后,结果与之相反。然而,不管是转染MSX2过表达质粒还是MSX2-siRNA,都只影响β-catenin的蛋白水平,而不影响其mRNA水平。同时,在JEG-3细胞中过表达MSX2,导致E-cadherin的表达降低（P<0.05）,而转染MSX2-si RNA,导致E-cadherin的表达升高（P<0.05）。

参考文献

[1]Biphasic effects of FGF2 on odontoblast differentiation involve changes in the BMP and Wnt signaling pathways[J].Sagomonyants,Mina.Connective Tissue Research.2014(sup1)

[2]BMP4 Promotes EMT and Mesodermal Commitment in Human Embryonic Stem Cells via SLUG and MSX2[J].Anne Richter,Lena Valdimarsdottir,Helga Eyja Hrafnkelsdottir,Johann Frimann Runarsson,Arna Run Omarsdottir,Dorien Ward‐van Oostwaard,Christine Mummery,Gudrun Valdimarsdottir.Stem Cells.2014(3)

[3]Conditional Deletion of MSX Homeobox Genes in the Uterus Inhibits Blastocyst Implantation by Altering Uterine Receptivity[J].Takiko Daikoku,Jeeyeon Cha,Xiaofei Sun,Susanne Tranguch,Huirong Xie,Tomoko Fujita,Yasushi Hirota,John Lydon,Francesco DeMayo,Robert Maxson,Sudhansu K.Dey.Developmental Cell.2011(6)

[4]Msx1 and Dlx5 function synergistically to regulate frontal bone development[J].Il‐HyukChung,JunHan,JunichiIwata,YangChai.Genesis.2010(11)

[5]梁浩.MSX2对人胎盘滋养层细胞侵袭能力的影响及机理研究[D].重庆医科大学,2016.