大鼠维生素B3(VB3)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

大鼠维生素B3(VB3)ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中大鼠维生素B3（VB3）的含量。

原理：试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被大鼠维生素B3（VB3）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠维生素B3（VB3）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

ELISA流程图

操作步骤：

1从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

4弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

5每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

6每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

7实验结果计算

以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。

应用^[4][5]

用于甲基苯丙胺对神经细胞的毒性及烟酰胺的保护作用研究

烟酰胺，又名：维生素B3，是一种必须的营养物质，存在于谷物和家畜的肉中，常被用来作为一种营养补充剂。烟酰胺是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（辅酶I-NAD）的前体，并在线粒体电子传递链传递电子至氧，并释放能量，氧化磷酸化作用利用这些能量制造三磷酸腺苷（ATP）。参与体内葡萄糖酵解、脂肪代谢、丙酮酸代谢等过程，为脂质代谢，组织呼吸的氧化作用和糖元分解所需之成分。

最近，对烟酰胺的研究表明，烟酰胺不仅是一种机体必须的营养物质，而且对细胞有着保护作用。对于烟酰胺的细胞保护作用，在越来越多的实验中得到了证实。

通过建立METH给药模型，通过注射烟酰胺，探讨烟酰胺对METH给药模型的保护作用及其可能的保护机制，对于METH中毒机制的研究具有一定的启发作用，为进一步探索METH治疗和干预提供一定的基础。

方法：用高效液相色谱检测海马区和纹状体区DA含量；用NO、SOD、MDA试剂盒检测海马区和纹状体区中NO、SOD、MDA的含量变化；用原位缺口末端标记法（TUNEL）观察细胞凋亡情况及烟酰胺干预的影响。结果：METH给药模型中多巴胺和SOD的含量有显著性下降，预先应用烟酰胺能使多巴胺和SOD的下降有显著性减轻，烟酰胺+METH组与METH组间比较差异有显著性意义（P=0.000＜0.01）；METH给药模型中NO和MDA均有显著性上升，预先应用烟酰胺能使NO和MDA的下降有显著性减轻，烟酰胺+METH组与METH组间比较差异有显著性意义（P=0.000＜0.01）；METH给药模型中海马区和纹状体区可见大量的凋亡细胞，预先应用烟酰胺能使凋亡细胞显著性减少，烟酰胺+METH组与METH组间比较差异有显著性意义（P=0.000＜0.01）。

参考文献

[1]Nicotinamide therapy protects against both necrosis and apoptosis in a stroke model[J].Jun Yang,Lori K Klaidman,Mei Ling Chang,Seyha Kem,Taku Sugawara,Pak Chan,James D Adams.Pharmacology,Biochemistry and Behavior.2002(4)

[2]Nicotinamide Prevents N-methyl-N-nitrosourea-induced Photoreceptor Cell Apoptosis in Sprague-Dawley Rats and C57BL Mice[J].Katsuji Kiuchi,Katsuhiko Yoshizawa,Nobuaki Shikata,Miyo Matsumura,Airo Tsubura.Experimental Eye Research.2002(3)

[3]Delayed treatment with nicotinamide（vitamin B 3）reduces the infarct volume following focal cerebral ischemia in spontaneously hypertensive rats,diabetic and non-diabetic Fischer 344 rats[J].Yohtaro Sakakibara,Alim P Mitha,Issam A Ayoub,Christopher S Ogilvy,Kenneth I Maynard.Brain Research.2002(1)

[4]Role of vitamins in determining apoptosis and extent of suppression by bcl-2 during hybridoma cell culture[J].A.Ishaque,M.Al-Rubeai.APOPTOSIS.2002(3)

[5]陈汉.甲基苯丙胺对神经细胞的毒性及烟酰胺的保护作用[D].军医大学,2007.