小牛血清的应用

背景^[1-3]

小牛血清是以20天或更小的小牛血液为原料，经采集、批量混合、0.1μm微孔滤芯无菌过滤分装而成，小牛血清外观黄色澄清，微溶血，有异物稍粘稠液体，内毒素含量低于50EU/ml。

小牛血清

血清的功能：

牛血清是细胞培养中用量的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，常用于动物细胞的体外培养，具有极为重要的功能。

（1）提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。

（2）提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力。

（3）有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。

（4）是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。

（5）起酸碱度缓冲液作用。

（6）提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。

解冻血清注意事项：避免产生沉淀物

（1）解冻血清时，请按照所建议的逐步解冻法(-2℃至4℃至室温)，若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃，实验显示非常容易产生沉淀物。

（2）解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生

（3）请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害，而影响血清的质量。

（4）血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。

（5）若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。

血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理。欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g稍微离心，上清液即可接着加入培养基内一起过滤。但不建议以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞过滤膜。

应用^[4][5]

用于PERK/eIF2α通路介导氧化型低密度脂蛋白诱导的内皮细胞凋亡及辛伐他汀的干预作用研究

探讨辛伐他汀抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的内皮细胞凋亡及其与PERK/eIF2a通路的关系。

方法研究辛伐他汀对ox-LDL诱导的内皮细胞凋亡、CHOP mRNA、caspase-3活性的影响。培养细胞分为7组：空白对照组：用含1%小牛血清的DMEM培养液孵育内皮细胞24小时；ox-LDL组：用含100μg/ml ox-LDL的培养液孵育内皮细胞24小时；ox-LDL+辛伐他汀（0.μM）组：加入终浓度为0.1μM的辛伐他汀孵育细胞1小时后,加入100μg/ml ox-LDL继续孵育24小时；

ox-LDL+辛伐他汀（0.5μM）组：加入终浓度为0.5μM的辛伐他汀孵育细胞1小时后,加入100μg/ml ox-LDL继续孵育24小时；ox-LDL+辛伐他汀（2.5μM）组：加入终浓度为2.5μM的辛伐他汀孵育细胞1小时后,加入100μg/ml ox-LDL继续孵育24小时；+salubrinal组：加入终浓度为40pM的salubrinal（特异性eIF2a磷酸化抑制剂）孵育细胞1小时后,加入100μg/ml ox-LDL的培养液孵育内皮细胞24小时；+DEVD-CHO组：加入终浓度为100μM的DEVD-CHO（特异性caspase-3抑制剂）孵育细胞1小时后,加入100μg/ml ox-LDL的培养液孵育内皮细胞24小时；

采用流式细胞仪检测内皮细胞凋亡率,采用Real-time PCR法检测CHOP mRNA的表达,采用比色法检测内皮细胞内caspase-3活性。

参考文献

[1]Impaired MEK Signaling and SERCA Expression Promote ER Stress and Apoptosis in Insulin-Resistant Macrophages and Are Reversed by Exenatide Treatment[J].Chien-Ping Liang,Seongah Han,Gang Li,Ira Tabas,Alan R.Tall.Diabetes.2012(10)

[2]Autophagy in Atherosclerosis:A Potential Drug Target for Plaque Stabilization[J].Dorien M.Schrijvers,Guido R.Y.De Meyer,Wim Martinet.Arteriosclerosis,Thrombosis,and Vascular Biology.2011(12)

[3]Oxidized Low-Density Lipoprotein and Atherosclerosis Implications in Antioxidant Therapy[J].Sona Mitra,Abhishek Deshmukh,Rajesh Sachdeva,Jingjun Lu,Jawahar L.Mehta.The American Journal of the Medical Sciences.2011(2)

[4]Microparticles,Vascular Function,and Atherothrombosis[J].Pierre-Emmanuel Rautou,Anne-Clémence Vion,Nicolas Amabile,Gilles Chironi,Alain Simon,Alain Tedgui,Chantal M.Boulanger.Circulation Research.2011(5)

[5]张国强.PERK/eIF2α通路介导氧化型低密度脂蛋白诱导的内皮细胞凋亡及辛伐他汀的干预作用[D].中南大学,2012.