KASUMI-6 CELL:急性髓系细胞白血病细胞系的应用

背景^[1-3]

KASUMI-6 CELL急性髓系细胞白血病细胞系具有人急性淋巴白血病细胞的典型特征，是研究人急性淋巴白血病的极佳材料。Kasumi-6细胞是一个带有8：21号染色体转位的白血病细胞株，这个转位使得AML1基因和ETO(或称MTG8)基因串联，使融合基因AML1-ETO(也称作AML1-MTG或RUNX1-CBF2T1)的表达升高，因而细胞产生嵌合的AML1-ETO蛋白。

这个蛋白下调CEBPA mRNA、蛋白和DNA的结合活性，而这种结合对粒性白细胞的分化是极端重要的。Kasumi-6细胞建立于一位急性白血病患者的外周血，Kasumi-6细胞髓过氧化物酶阳性，显示其髓性成熟的形态。增生试验显示，培养的Kasumi-6细胞对IL-3、IL-6、G-CSF(粒细胞集落刺激因子)、GM-CS(粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子)有响应，但对IL-1和IL-5没有响应。

KASUMI-6 CELL急性髓系细胞白血病细胞

在体外液体培养中分别加入二甲亚砜、G-CSF、IL-5，也没有观察到粒性或嗜酸性细胞的成熟。Kasumi-6细胞培养过程中，加入佛波酯可以看到诱导出的巨噬细胞样细胞。

急性髓系白血病(acute myelocytic leukemia，AML)包括所有非淋巴细胞来源的急性白血病。急性髓系白血病是造血系统的髓系原始细胞克隆性恶性增殖性疾病。是一个具有高度异质性的疾病群，它可以由正常髓系细胞分化发育过程中不同阶段的造血祖细胞恶性变转化。

应用^[4][5]

用于白血病、淋巴瘤生物学行为相关基因EZH2和SPRR1A的临床意义与分子机制研究

从急性髓系白血病和弥漫大B细胞淋巴瘤两个方面对我们既往开展的有关上述两种疾病生物学行为相关基因以及调控网络分析、建立等研究工作做以汇报。

方法:1、细胞系及病例组织标本:急性髓系白血病研究中所用细胞系为:急性髓系白血病细胞系人急性单核细胞白血病细胞THP-1（3111C0001CCC000057）、人急性早幼粒白血病细胞HL-60（3111C0001CCC000037）均购自国家实验细胞资源共享平台（中国,北京）;急性粒细胞白血病部分分化型（M2）细胞Kasumi-6购自ATCC细胞库。弥漫型大B细胞淋巴瘤研究中病例标本来自DLBCL的患者。

治疗前通过体格检查、骨髓活检、胸部CT和腹部CT评估病灶转移。病例根据Ann Arbor系统分期。淋巴节外部位侵犯和较大肿块的直径亦作为评估因素。所有病人签署了书面知情同意书,研究协议和样本收集通过了中国医科大学伦理委员会批准。

2、方法:急性髓系白血病研究所用主要实验方法:急性髓系白血病细胞系凋亡检测通过膜联蛋白V-FITC和碘化丙啶（PI）的双染进行,自发性凋亡细胞的比率应用流式细胞技术测定。细胞系的转染应用脂质体（Invitrogen,Carlsbad,CA,USA）将siRNAs转染到经过纯化的AML细胞中。蛋白印迹分析在EZH2-si和EZH2-c AML细胞转染48h后收集进行,目标蛋白与内参蛋白（GAPDH）的相对浓度用ImmuNe software来分析。

弥漫型大B细胞淋巴瘤研究所用主要研究方法:应用免疫组织化学法检测淋巴瘤病理切片中SPRR1A蛋白表达含量,根据以下标准作半定量分类:0:<1%的细胞离散表达SPRR1A;1+:≥1且<10%的细胞离散表达SPRR1A;2+:≥10%的细胞离散表达SPRR1A。评分为1+或2+的样本被认为是阳性。

3、统计学处理:急性髓系白血病研究中数据采用GraphPad Prism 5进行作图及统计分析,计量数据的组间比较采用t检验。弥漫大B细胞淋巴瘤研究中数据采用SPSS 19.0统计软件包进行处理。SPRR1A的表达与临床病理参数的相关性采用Pearson卡方检验进行。总体生存期（Overall survival,OS）采用Kaplan–Meier方法计算,组间生存差异采用log-rank检验进行比较。Cox回归模型用于进行单变量及多变量的独立危险因素筛选。P<0.05定义为具有统计学意义。

参考文献

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[3]Retinoic acid and arsenic trioxide sensitize acute promyelocytic leukemia cells to ER stress.[J].Masciarelli S,Capuano E,Ottone T,Divona M,De Panfilis S,Banella C,Noguera N I,Picardi A,Fontemaggi G,Blandino G,Lo-Coco F,Fazi F.Leukemia.2018(2)

[4]Successful treatment of acute promyelocytic leukemia in pregnancy with single-agent all-trans retinoic acid.[J].Nellessen Cordula M,Janzen Viktor,Mayer Karin,Giovannini Giulia,Gembruch Ulrich,Brossart Peter,Merz Waltraut M.Archives of gynecology and obstetrics.2018(2)

[5]张昊.白血病、淋巴瘤生物学行为相关基因EZH2和SPRR1A的临床意义与分子机制研究[D].中国医科大学,2018.