人T细胞白血病细胞的应用

背景^[1-3]

人T细胞白血病细胞是Jurkat-FHCRC细胞株(Jurkat细胞株的衍生)的一个克隆。Jurkat细胞株来源于一个14岁男孩的外周血。经佛波酯和外源凝集素或抗T3单克隆抗体(两种类型的诱导都需要)诱导后可产生大量IL-2。

T细胞白血病（adult T-cell leukemia，ATL）是一种与人T细胞白血病病毒Ⅰ（HTLV-Ⅰ）感染直接相关、发生于成人的特殊类型淋巴系统恶性克隆增殖性疾病，其病变主要发生在外周血淋巴细胞，亦可侵及骨髓。

人T细胞白血病细胞

T细胞性白血病多依据临床分型不同而决定治疗策略，慢性型或冒烟型患者多采用对症支持治疗，以积极控制感染和改善脏器功能为主，当出现病情进展或急性转变时，方可考虑采用积极治疗措施。急性型或淋巴瘤型ATL虽采用化学、生物学等积极治疗措施，但疗效不佳，中位生存期2～6个月。

细胞培养步骤：

1）准备RPMI-1640培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

4）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）补加到6ml。第二天换液并检查细胞密度。

5）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

收到细胞后首次传代推荐将细胞悬液按1：2的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中，建议冻存一支备用，后续传代根据实际情况按1:2到1:5的比例进行。换液可通过添加几毫升新鲜培养基或离心之后去上清液，添加新培养基重悬培养。

应用^[4][5]

用于白藜芦醇对人T淋巴白血病细胞（Hut78）增殖和凋亡的影响及其下调C-myc蛋白的表达研究

观察白藜芦醇（Res）对白血病细胞增殖及凋亡的影响,了解其抗白血病效应的机制,探讨白藜芦醇对人T淋巴白血病细胞（Hut78）的增殖及凋亡的影响,并观察不同浓度白藜芦醇对Hut78细胞C-myc蛋白表达的影响,从而初步探讨白藜芦醇抗白血病效应的作用机制。

方法：对人T淋巴白血病细胞（Hut78）进行培养,并采用该细胞作为白藜芦醇的作用靶细胞,用CCK-8法检测不同浓度白藜芦醇处理后Hut78细胞的增殖情况,。用流式细胞学（Annexin-V）分析经不同浓度白藜芦醇处理不同时间后Hut78细胞的凋亡情况。

采用Western blot方法检测细胞中C-myc蛋白的变化。结果：CCK-8法检测发现白藜芦醇在一定范围内显著抑制Hut78细胞的增殖,并呈剂量-时间依赖性,白藜芦醇作用于Hut78细胞24小时后的半浓度抑制率即IC50为98.7μmol/L。

流式细胞分析表明,白藜芦醇可诱导Hut78细胞凋亡,并随药物浓度增加凋亡细胞增多,100μmol/L白藜芦醇作用于细胞24小时凋亡率为（54.43±2.66）%、200μmol/L白藜芦醇作用下细胞凋亡率（63.90±2.55）%。药物处理细胞48h后,100μmol/LRes作用细胞凋亡率为（78.90±1.46）%、200μmol/L白藜芦醇处理后凋亡率为（91.97±2.67）%。Western blot方法检测到细胞中C-myc蛋白的表达显著下降。

结论：白藜芦醇具有明显的抗白血病效应,可以以时间-浓度依赖性的抑制白血病细胞增殖。能够有效的诱导白血病细胞凋亡。

参考文献

[1]Tamiya-Koizumi Keiko,Mizutani Naoki,Sobue Sayaka,et al.Resveratrol-induced transcriptional up-regulation of ASMase(SMPD1)of human leukemia and cancer cells[J].Biochemical&Biophysical Research Communications,2016,470(4).

[2]Binghua Wang,Jiao Liu,Zhanfeng Gong.Resveratrol induces apoptosis in K562 cells via the regulation of mitochondrial signaling pathways.[J].International journal of clinical&experimental medicine,2015.8

[3]Hongying Tian,Zhongcui Yu.Resveratrol induces apoptosis of leukemia cell line K562 by modulation of sphingosine kinase-1 pathway.[J].International journal of clinical and experimental pathology,2015,8(3).

[4]Azimi Ako,Hagh Majid Farshdousti,Talebi Mehdi,et al.","Time-and Concentration-Dependent Effects of Resveratrol on miR 15a and miR16-1 Expression and Apoptosis in the CCRF-CEM Acute Lymphoblastic Leukemia Cell Line[J].Asian Pacific Journal of Cancer Prevention,2015,16(15).

[5]马丽君.白藜芦醇对人T淋巴白血病细胞（Hut78）增殖和凋亡的影响及其下调C-myc蛋白的表达[D].郑州大学,2016.