槲皮素的几种制备方法报道

背景及概述^[1-2]

槲皮素化学名称为3,3',4',5,7-五羟基黄酮，是植物界分布最广泛的黄酮类化合物，大约68％的植物中都含有槲皮素，多种食物均含此成分。依据饮食习惯的不同，人体平均每天摄入10～100mg槲皮素。槲皮素具有广泛的生物学作用，如抗肿瘤、抗炎、抗氧化、降压、抗菌、抗病毒、抗过敏、抗血小板聚集和清除自由基等。

槲皮素的生理活性远高于芦丁，具有抗氧化、抗病毒，以及增强雌性激素的分泌等性质，因此在药物制剂中，常被用作食品添加剂或辅助药物给药。在自然界植物中的分布也很广泛，但是含量却很低。槲皮素在植物中的含量也只有千分之几到万分之几，很难提取。

制备^[1-3]

报道一、

a.以黑曲霉菌(Aspergillusniger)在含4％麦芽浸出物和0.5％人参浸出物的培养基中，30℃温度下通风培养30-40小时，培养后除菌，培养液用80％饱和硫酸铵沉淀酶蛋白，收集沉淀，用pH5.8的0.02M醋酸钠缓冲液溶解，透析除去硫酸铵，离心除渣，冻干，即得酶。

b.取7克上述酶溶于200毫升pH5.8的0.02M醋酸钠缓冲液中；取12克市售的商品芦丁单体与115毫升pH5.8的0.02M醋酸钠缓冲液和85毫升95％乙醇混合均匀，使反应物芦丁的浓度为0.01-10％，乙醇浓度为0-35％，在温度15℃温度下搅拌反应24小时。

c.溶液中加入36克NaOH，过滤除去蛋白沉淀，滤液中加入400ml2.5NHCl，室温静置30分钟，过滤收集沉淀，沉淀物用蒸馏水充分洗至中性，减压干燥沉淀，得到6克产物(经高效液相色谱法测定槲皮素含量在90％以上)。

上述酶经DEAE-Cellulose离子交换树脂柱方法和BioRed蛋白制备色谱仪(文献3)分离提纯得到两种甙酶蛋白，用SDS电泳方法测定分子量，其酶蛋白分子量分别为58000和68000。分子量为58000的酶蛋白，水解芦丁的鼠李糖基，变成异槲皮素；分子量为68000的酶蛋白，水解异槲皮素的葡萄糖基，变成槲皮素。

报道二、

将20L水加热至沸腾后加入芦丁100g，并保持搅拌状态以溶解芦丁，待芦丁溶解完全后，趁热抽滤，室温放置过夜析晶，过滤，干燥，得到精制后的芦丁；将1%体积百分含量的硫酸水溶液加热至沸腾后加入精制后的芦丁，精制后的芦丁与硫酸水溶液的料液比为1kg：25L，水解完全后，过滤，收集滤饼，蒸馏水洗至中性，以pH试纸检测，达标后将样品置于烘箱中干燥，得到槲皮素粗品；往槲皮素粗品中按照1kg：15L的液料比加入乙醇，搅拌均匀，静置，过滤，干燥，得槲皮素成品，槲皮素成品的纯度为99.52%，山奈酚的含量为0.20%，异鼠李素的含量为0.13%，其中纯度以峰面积归一法进行计算。

报道三、

1、芦丁的提取

取200g生药芦丁置于容器中，用清水漂洗干净，捞取上浮的花蕾并弃去下沉的杂质，将洗净的花蕾置于容器中加1000ml蒸馏水加热，超声30KHz～50KHz提取45min，不断补充蒸发掉的水分，趁热过滤，收集滤液，滤渣再加400ml蒸馏水用上述同样的方法提取一次，合并两次滤液，浓缩至600ml，放置24h后，析出芦丁，抽滤，沉淀用少量冷水(0～8℃)洗涤三遍，抽干，60℃以下干燥，称重得粗提芦丁19.3g，即可计算粗提芦丁的收率为9.65％。

2、芦丁精制

将粗制的芦丁研细，加95％乙醇回流溶解(每2g芦丁需要添加70毫升乙醇)，趁热过滤，收取一半的滤液浓缩至原体积的30％～40％(另外一半滤液用于下一步制备槲皮素使用)，放置，析出结晶，抽滤，干燥，得精制芦丁，称重9.16g，即可计算精制芦丁的收率9.16％。

3、由所得芦丁制备槲皮素

取上述步骤中保留的一半芦丁滤液，加入1mol/L的硫酸，水浴回流1～1.5h,待全部水解后，蒸去乙醇，冷却、析出槲皮素，抽滤。沉淀槲皮素经过水洗、抽干后，干燥称重，得槲皮素6.788g，可计算得率为6.788％，再用乙醇重结晶，可得黄色针状结晶，为槲皮素精品。

参考文献

[1][中国发明,中国发明授权]CN03133636.1酶法水解芦丁制备异槲皮素和槲皮素的方法

[2][中国发明,中国发明授权]CN201310608063.0一种高纯度槲皮素的制备方法

[3][中国发明]CN201610130091.X一种从槐花米中提取芦丁并制备槲皮素的方法