3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的检测方法

背景及概述^[1]

合成香料3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩具有烧烤、坚果的气味，于2002年开始作为食品用香料使用。但是2013年欧洲食品安全管理局公布了对该物质重新评估的意见，认为其在体内和体外试验均表现出致突变性，作为食品用香料使用存在安全问题，将其从食品用香料法规附录I食品中香料清单中删除。

2013年8月之前，我国允许将3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩作为食品用香料使用，2014年8月14日，中国香精香料化妆品工业协会发布了香料香精行业自律文件，规定香料生产企业不得生产用作食品用香料的3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩，食品用香精生产企业调整配方，不得再使用该物质。但其作为合成香料仍然收录在GB2760-2014中。

检测方法^[1-2]

报道一、

土豆香精中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的测定

(1)样品制备：取1mL土豆香精，加入去离子水定容至10mL，得样品液；

(2)样品测定：在步骤(1)的样品液，加入5mg磁性Fe₃O₄纳米粒子，涡旋混合1min，用外磁场固液分离，取出上清液；加入500μL辛酸与100μL TMN-6组成的混合液，涡旋混合1min，形成混浊溶液，加入300μL氨水，涡旋混合1min，形成均匀胶束，加入盐酸1.5mL，涡旋混合2min，4000r/min下离心8min，取出上层辛酸与非离子表面活性剂TMN-6的混合物，经0.45μm有机相滤膜过滤后用HPLC分析，HPLC色谱条件为：流动相：等度洗脱甲醇-水溶液，甲醇-水的比例为65:35，检测波长为：296nm，柱温为：25℃，流速：1mL/min。测得3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩含量12.5μg/g。

报道二、

1、仪器及试剂：

气相色谱-质谱联用仪(Thermo TRACE 1300)色谱柱(Thermo TG-WAXMS，30m× 0.25mm×0.25μm)，Millipore Q-pod Element超纯水系统(美国Millipore公司)；AB204-S 型电子分析天平(感量0.0001g)(瑞士梅特勒公司)，0.22μm微孔过滤膜，超声清洗器。

超纯水(18MΩ)，乙醇(色谱纯，百灵威化学试剂公司)，250pmoL/μL，安捷伦公司)。

2、溶液配制

(1)内标溶液配制

内标储备液：准确称取0.0365g(精确至0.0001g)草酸二乙酯于50mL容量瓶中，用 正己烷溶解并定容，得到0.73g/L的内标母液。于阴凉、干燥处保存，防止受潮。

内标萃取液：移取1mL内标储备液于1000mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，得浓 度为5μmol/L的萃取液，于阴凉、干燥处保存。

(2)标准工作溶液配制：准确移取0.1002g纯度为99.8％的3-乙酰基-2,5-二甲基 噻吩标准溶液于100ml容量瓶中，用内标萃取液定容，得3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩母液。分 别移取不同体积的母液，用内标萃取液配制为浓度为0.1mg/L、0.5mg/L 1.0mg/L 2.0mg/L 5.0mg/L 10.0mg/L的六级系列标准溶液。

(3)气相色谱/质谱条件

色谱条件:采用Thermo TG-WAXMS色谱柱进行分离，进样口温度220℃，进样量1μL， 分流比1:10，柱流量：1mL/min,升温程序：50℃保持1min,以20℃/min升至200℃，保持 20min；

质谱条件:采用电子电离源，电力电压70eV，离子源温度300℃；四级杆温度280℃， 溶剂延迟：7.5min，选择离子检测扫描定量，3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩及内标物草酸二乙 酯定量和定性选择离子如下表：

(4)标准曲线绘制：将不同系列浓度的标准溶液进入气相色谱-质谱联用仪检测； 以被测物的峰面积与其内标的峰面积的比值(Y)对被测物的浓度(X)进行线性回归，求得3- 乙酰基-2,5-二甲基噻吩的标准曲线。

(5)样品制备和分析：准确称取0.3g待测样品，放入50ml磨口三角瓶中，准确加入 25mL内标萃取液(草酸二乙酯浓度为5μmol/L)，超声15-30min，取出后摇荡锥形瓶片刻使其 混合均匀，静置，取上清液经0.22μm滤膜过滤后进行气相色谱－质谱联用仪分析。

本实施例中选取的不同生产厂家、不同类型的食品添加剂58个样品，共有2个样品 检测出含有3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩，含量分别为37.6mg/kg(样品状态为液体)和 102.3mg/kg(样品状态为浸膏)。

参考文献

[1] [中国发明] CN201910620180.6 一种检测食品中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的方法

[2] [中国发明,中国发明授权] CN201510069074.5 一种食品添加剂中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的测定方法