磺胺硝苯的含量测定方法

背景及概述^[1]

磺胺硝苯是一种磺胺类化合物。磺胺类化合物是一类极其重要的化合物，尤其是在天然产物、药物分子中被广泛应用。为保障食用者的安全我国及欧盟规定肉类食品中的磺胺类药物的最高残留限量（maximum residue limit，MRL） 为：单一磺胺类药物25.0 μg/kg， 磺胺类药物总量100.0 μg/kg。

制备^[1]

向反应管中加入对二硝基苯(0.2mmol)，焦亚硫酸钠(0.6mmol，3.0equiv)，4-乙酰胺基苯硼酸(0.3mmol，1.5equiv)，氯化胆碱(0.2mmol，1.0equiv)，磷酸锂(0.4mmol，2.0equiv),抽空换氮三次后加溶剂DMF(2.0mL)，反应体系加热至130℃反应10小时。至硝基化物全部转化完全后，将反应体系冷却至室温，加水淬灭，乙酸乙酯(10mL*3)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离得到纯化的目的产物磺胺硝苯(50％)。¹HNMR(400MHz,d6-DMSO)δ11.19(s,1H),10.36(s,1H),8.16–8.09(m,2H),7.84–7.77(m,2H),7.78–7.72(m,2H),7.33–7.24(m,2H),2.05(s,3H).；¹³CNMR(100MHz,d6-DMSO)δ168.6,143.8,143.2,141.9,131.8,127.6,124.9,118.3,117.3,23.6.

含量测定^[2]

液相色谱-串联质谱负离子模式测定鸡肉中磺胺硝苯的残留，方法如下：

1.材料与试剂

鸡肉样品购于淮安苏果超市。磺胺硝苯（纯度为98%）德国Dr.Ehrenstorfer公司；甲醇、乙酸乙酯均为色谱纯美国默克公司；正己烷、甲酸均为色谱纯美国天地公司；无水硫酸钠为分析纯南京化学试剂有限公司；水为超纯水。

2.仪器与设备

TSQQuantumUltraEMR串联质谱仪（配有电喷雾离子（electrosprayionization，ESI）源）、Surveyor液相色谱系统（包括自动进样器Autosampler1.3）、MSPump2.0质谱泵美国ThermoFisher公司；ZORBAXSB-C18色谱柱美国Agilent公司；氮吹仪美国Organomation公司；超纯水器美国Millipore公司；离心机美国Sigma公司；超声波清洗仪宁波新芝生物科技公司。

3.方法

3.1标准溶液配制

准确称取磺胺硝苯标准品10.00mg，用甲醇溶解并定容至10mL，配成1.0g/L标准储备液，于冰箱中冷冻避光保存，实验中根据需要用甲醇稀释至适当质量浓度的标准工作液。

3.2样品提取

准确称取（5.00±0.05）g样品于50mL离心管中，加入10mL甲酸-乙酸乙酯（2∶98，V/V），于涡旋混合器上混匀1min，超声波提取10min；以8000r/min的速率离心3min，转移上层有机溶液至20mL氮吹管中；再用8mL甲酸-乙酸乙酯（2∶98，V/V）重复提取残渣1次，合并2次提取液于氮吹管中，于45℃水浴中氮吹至干，用1.0mL甲醇-水（2∶8，V/V）溶解，加入1.0mL正己烷溶液，涡旋混匀，10000r/min离心3min，下层溶液经0.22μm滤膜过滤至进样瓶中，供液相色谱-串联质谱仪分析。

3.3HPLC-MS/MS条件

HPLC条件：AgilentZORBAXSB-C18色谱柱（150mm×2.1mm，3.5µm）；进样量：25μL；柱温：30℃；流动相：A为5mmol/L乙酸铵，B为甲醇；梯度洗脱条件：0～4min70%A；4.1～6.5min20%A；6.6～8.5min70%A；流速：250μL/min。MS/MS条件：采用ESI源；负离子方式扫描；喷雾电压：2500V；离子源温度：400℃；鞘气：40bar，

辅助气：15bar；毛细管温度：350℃；多反应监测（multiplereaction monitoring，MRM）方式检测；优化质谱条件见表1。

参考文献

[1][中国发明]CN202010157997.7磺胺类化合物及其无金属催化的构建方法和应用

[2]魏云计,朱臻怡,冯民,王小晋,何健,张伶俐,魏斌,丁涛.液相色谱-串联质谱负离子模式测定鸡肉中磺胺硝苯的残留[J].肉类研究,2016,30(08):35-38.