小鼠内皮抑素(ES)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

小鼠内皮抑素(ES)ELISA KIT采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中内皮抑素(ES)的水平。向预先包被了内皮抑素(ES)单克隆抗体的酶标孔中加入内皮抑素(ES)，温育；温育后，加入生物素标记的抗内皮抑素(ES)抗体，再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中内皮抑素(ES)的浓度呈正相关。

小鼠内皮抑素(ES)ELISA KIT

小鼠内皮抑素(ES)Elisa试剂盒操作步骤

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于内皮抑素基因腺病毒载体表达系统治疗小鼠黑色素瘤的实验研究

检测内皮抑素基因腺病毒载体表达系统（Ad-mES）体外生物学活性及其治疗小鼠黑色素瘤的效果;初步探讨内皮抑素的抗肿瘤机理。

方法:在HEK293细胞内扩增腺病毒,50%组织培养感染剂量法测定其滴度;RT-PCR、Western Blot和ELISA法检测目的基因的表达;MTT法和流式细胞术检测靶细胞的体外生长情况。多因素多水平析因分析法设计测定体内转染率;观察各组小鼠肿瘤的生长、转移和生存率,Western Blot、免疫组化和透射电镜等鉴定组织内目的基因的表达、血管生成和靶细胞的生长。

结果:腺病毒的滴度为1010pfu/ml,靶细胞明确表达内皮抑素基因,Ad-mES抑制内皮细胞的增殖;治疗小鼠黑色素瘤时,取瘤内注射和间隔7天给药Ad的体内转染率最高（MOI=500时,37.33%）。治疗组小鼠平均生存时间延长,肿瘤体积增长减慢,肿瘤新生血管生成减少。结论:Ad-mES对小鼠黑色素瘤有较好的治疗效果。

参考文献

[1]Angiogenesis Inhibition by Angiostatin,Endostatin and TNP-470 Prevents Cyclophosphamide Induced Cystitis[J].Wolf-Dietrich Beecken,Tobias Engl,Roman Blaheta,Wassilios Bentas,Eike-Gerd Achilles,Dietger Jonas,Yuen Shing,Kevin Camphausen.Angiogenesis.2004(1)

[2]Simulation of tumor-induced angiogenesis and its response to anti-angiogenic drug treatment:mode of drug delivery and clearance rate dependencies[J].Daniel Tee,Joseph DiStefano III.Journal of Cancer Research and Clinical Oncology.2003(1)

[3]VEGF and Endostatin Levels in Wound Fluid and Plasma after Breast Surgery[J].F.P.K.Wu,K.Hoekman,S.Meijer,M.A.Cuesta.Angiogenesis.2003(4)

[4]Endostatin Levels in Exudative Pleural Effusions[J].M.Sumi,K.Kagohashi,H.Satoh,H.Ishikawa,Y.Funayama,K.Sekizawa.Lung.2003(6)

[5]荣国强.内皮抑素、阿霉素联合使用对肝叶切除小鼠原位移植性肝癌的抑制作用及内皮抑素对腹壁切口愈合影响的实验研究[D].苏州大学,2005.