改良MASSON三色染色试剂盒的应用

背景^[1-3]

改良MASSON三色染色试剂盒与常规Masson三色染色的区别在于采用天青石蓝苏木素淡染细胞核。其特点在于：分化时间短(1～2分钟)；色彩清晰鲜艳；适用范围广，适宜于组织的石蜡切片、冰冻切片等染色；所染切片保存时间长且不易褪色。改良Masson染色胶原纤维呈蓝色，肌纤维、胞质、纤维素、角蛋白和红细胞呈红色，细胞核呈蓝色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。

改良MASSON三色染色图

结缔组织狭义上是指其含有的三种纤维：胶原纤维、网状纤维、弹力纤维、而胶原纤维（collagen fiber）是分布、含量多的一种纤维。Masson三色染色又称马松染色，是结缔组织染色中的一种方法，是胶原纤维染色而经典的技术方法。所谓三色染色通常是指染胞核和能选择性的显示胶原纤维和肌纤维。

该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关：分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织，而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。

然而，淡绿或苯胺蓝的分子量很大，因此Masson染色后肌纤维呈红色，胶原纤维呈绿色或蓝色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。

改良Masson染色胶原纤维呈蓝色，肌纤维、胞质、纤维素、角蛋白和红细胞呈红色，胞核呈蓝褐色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。

应用^[4][5]

用于组织化学染色方法在生长板组织学研究

通过对正常大鼠胫骨标本进行石蜡包埋、切片后分别应用常规HE染色法、Masson三色法、AB-PAS染色法、甲苯胺蓝染色法、藏花红染色法、AZAN染色法、VG染色法、Mallory三色法、番红染色法、固绿染色法、番红-固绿染色法进行染色,比较上述多种组织学染色方法在正常大鼠胫骨生长板组织切片中的染色规律,探讨不同组织化学染色方法在生长板组织形态学研究中的应用。

方法:对正常生长发育期大鼠胫骨标本固定、脱钙后进行石蜡包埋和切片。切片脱蜡至水后分别进行（1）Masson三色法（苯胺蓝复染）染色:入A液5分钟;0.2%醋酸稍洗;入5%磷钨酸5-10分钟;0.2%醋酸洗2次;入B液5分钟;0.2%醋酸洗2次;梯度酒精脱水;二甲苯透明;中性树胶封片。Masson三色法（亮绿复染）染色:入A液5分钟;0.2%醋酸稍洗;入5%磷钨酸5-10分钟;0.2%醋酸洗2次;入B液5分钟;0.2%醋酸洗2次;梯度酒精脱水;二甲苯透明;中性树胶封片。（2）Mallory一步三色法染色:重铬酸钾液10分钟;流水冲洗2分钟;蒸馏水两次;酸性复红液2分钟;蒸馏水稍洗;苯胺蓝液20分钟;95%乙醇快速分化;直接无水乙醇脱水;二甲苯透明;中性树胶封固。

参考文献

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[3]MMP-9/Gelatinase B Is a Key Regulator of Growth Plate Angiogenesis and Apoptosis of Hypertrophic Chondrocytes[J].Thiennu H Vu,J.Michael Shipley,Gabriele Bergers,Joel E Berger,Jill A Helms,Douglas Hanahan,Steven D Shapiro,Robert M Senior,Zena Werb.Cell.1998(3)

[4]Cyclosporin A Rescues Thymocytes from Apoptosis Induced by Very Low Concentrations of Thapsigargin:Effects on Mitochondrial Function[J].Paul Waring,Joanne Beaver.Experimental Cell Research.1996(2)

[5]刘晓娟.组织化学染色方法在生长板组织学研究中的应用[D].河北医科大学,2007.