RV沙门菌增菌液体培养基的应用

背景^[1-3]

RV沙门菌增菌液体培养基英文全称是Rappaport Vassiliadis Salmonella Enrichment Broth，简称RVSEB，主要用于控制菌检查中沙门氏菌的选择性增菌培养。在TSB复苏培养后，取0.1ml加入10ml的RV沙门菌增菌液体培养基。

检验原理：大豆蛋白胨在培养基中作为基础营养物质，为细菌的生长提供所需的碳源、氮源、维生素以及一些矿物质等元素；氯化镁提供必需的离子；氯化钠维持均衡的渗透压；磷酸盐作为培养基的缓冲剂。孔雀绿能够抑制非沙门氏菌的生长。

RV沙门菌增菌液体培养基效果图

在RV沙门增菌液体培养基中，鼠伤沙门氏菌为浑浊；肠炎沙门氏菌为浑浊；

乙型副伤寒沙门菌为浑浊；大肠埃希氏菌为抑制或部分抑制；金黄色葡萄球菌为抑制。

成分(g/L)：大豆胨4.5；六水合氯化镁29.0；氯化钠8.0；磷酸氢二钾0.4

磷酸二氢钾0.6；孔雀绿0.036；pH值5.2±0.2 25℃。

用法：称取本品27.1g，加热搅拌溶解于1000ml纯化水中，分装试管，115℃高压灭菌20分钟，备用。

沙门菌是寄居在人类动物肠道内生化反应和抗原构造相似的革兰阴性杆菌。它是一种肠道致病菌，常常因为误食不洁食物引起，感染者出现严重腹泻。是人类食物中毒的主要病原之一。

由沙门氏菌引起的疾病主要分为两大类：一类是伤寒和副伤寒，另一类是急性肠胃炎。其中鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙门氏菌等是污染动物性产品，进而引起人类沙门氏菌食物中毒的主要致病菌。

沙门氏菌污染主要来源于患病的人和动物及其带菌者，主要由其粪便、尿、乳汁以及流产胎儿、胎衣和羊水排出的病菌污染水源、土壤和饲料等，其中饲料和水源的污染是导致沙门氏菌传染的主要原因。

应用^[4][5]

用于沙门氏菌、金黄色葡萄球菌及单增李斯特菌的同步快速检测方法的研究

在本研究中,根据现有通用增菌液及选择性增菌液,设计制备了一种能够同时富集沙门氏菌、金黄色葡萄球菌及单增李斯特菌的复合增菌肉汤。

通过单因素实验挑选出合适添加剂,并采用响应面分析对培养基成份进行了优化,最后得到SSL配方如下:胰蛋白胨17g/L、蛋白胨3g/L、磷酸二氢钾2.5g/L、葡萄糖2.5g/L、丙酮酸钠2.5g/L、甘露醇5g/L、氯化钠15g/L、氯化锂2g/L、亚碲酸钾1mg/L、萘啶酮酸10mg/L。经验证SSL可使得三种目标菌以相对一致的速度进行富集,经过37℃150r/min振荡培养24h后,菌体浓度到达107108CFU/mL,非目标菌生长受到抑制。

针对沙门氏菌的invA基因,金黄色葡萄球菌的sa442基因及单增利斯特菌的hly基因成功设计了三对引物和三条特异性探针,进行多重PCR扩增,并在此基础上进行病原菌的液相芯片检测。经过优化PCR产物与探针杂交的温度,得到杂交条件为52℃,20min,检测灵敏度可达100CFU/mL。

通过人工污染样品的检测和实际食品样品的检测,验证了SSL（S.enteritidis;S.aureus;L.monocytogens的复合增菌培养基）复合增菌技术及液相芯片检测体系的检测效果,预增菌及液相芯片检测全过程可在24h内完成,检测灵敏度可达到10CFU/mL。

本研究所建立的液相芯片检测方法在上述三种致病菌的快速和多重检测上是可行的。结果表明其具备良好的重复性、特异性和灵敏性特点。与国标法相比,检测时间减少,准确性提高,且可满足多重检测的要求。

参考文献

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[2]Improved multiplex immunoassay performance in human plasma and synovial fluid following removal of interfering heterophilic antibodies[J].Wilco de Jager,Berent J.Prakken,Johannes W.J.Bijlsma,Wietse Kuis,Ger T.Rijkers.Journal of Immunological Methods.2005(1)

[3]Application of a molecular beacon—real-time PCR technology to detect Salmonella species contaminating fruits and vegetables[J].Samantha Hu Liming,Arvind A Bhagwat.International Journal of Food Microbiology.2004(2)

[4]Comparison of selective and nonselective primary enrichments for the detection of Listeria monocytogenes in cheese[J].Nancy Rijpens,Lieve Herman.International Journal of Food Microbiology.2004(1)

[5]刘园园.沙门氏菌、金黄色葡萄球菌及单增李斯特菌的同步快速检测方法的研究[D].华南理工大学,2010.