PAGE凝胶银染试剂盒的应用

背景^[1-3]

PAGE凝胶银染试剂盒可以将PAGE凝胶中蛋白染色，蛋白质条带的银染是基于蛋白质中各种基团（如琉基、碳基等）与银的结合，然后用还原剂如甲醛在碱性环境下使Ag+还原成银颗粒，可把蛋白电泳带染成黑褐色。

PAGE凝胶银染图

PAGE凝胶银染试剂盒主要用于聚丙烯酰胺凝胶电泳染色。其灵敏度比考马斯亮蓝高，该产品整个过程操作简单，灵敏度高，能检测到10ng以下的蛋白条带。

操作步骤:

染色液配制(无水乙醇自备)

需要配制的染色液体积根据PAGE胶的大小而定，一般的mini-PAGE胶需要20-30mL。配制用的器皿清洗干净后用去离子水涮洗，染色液须用去离子水配制，现用现配。如果配制的溶液体积不是100mL，可以按比例改变各成分用量。

1.固定液：取40ml无水乙醇，10ml染色液A加去离子水至100ml，混匀；

2.敏化液：取30ml无水乙醇，10ml染色液C加去离子水至100ml，混匀；

3.银染液：称取0.12g试剂E，用50ml去离子水溶解，加入10ul染色液B混匀，加去离子水至100ml现用现配。

4.显色液：10ml显色液D和30ul染色液B加入去离子水至100ml，混匀，现用现配。

5.终止液：取5ml染色液A加去离子水稀释至100ml，现用现配。

染色步骤：

1.PAGE电泳结束后，将PAGE蛋白胶转移至玻璃平皿或搪瓷盘中，用固定液固定30min。

2.将PAGE胶转移至敏化液中，使染液没过PAGE胶，室温作用30min。可置于摇床上缓慢摇晃

3.弃去敏化液，用去离子水漂洗三次，每次10min。

4.将PAGE胶转移至银染液中，使染液没过PAGE胶，室温摇晃40min。

5.将PAGE胶转移至显色液中，使显色液没过PAGE胶，室温摇晃，该显色一般在10min左右。

6.再选择合适的时间进行终止，弃去显色液，加入终止液即可。最后可进行信号收集保存。

应用^[4][5]

用于杂交水稻种子纯度电泳鉴定技术的研究

应用SDS-PAGE和IEF技术对福建省目前播种面积较大的5个杂交组合及其三系以及9个不同的杂交种F1进行了分析比较,选择了一种快速、简便、经济的纯度鉴定方法同时建立了其标准参照程序,并对几份杂交水稻进行了纯度分析,探讨其在生产上的实用性及应用前景。

主要研究结果如下:1、利用SDS-PAGE电泳技术对5个杂交组合及其三系种子醇溶蛋白和胚蛋白进行了分析,结果表明:醇溶蛋白的多态性较低,同一杂交组合及其三系的差异不大,不能用于杂交水稻种子纯度的检测。胚蛋白的多态性丰富,三系及F1种子的谱带类型基本相同,但彼此间在电泳图谱上表现出很大的差异,可以将混入杂种F1的亲本及其他种子区分开来。我们采用的虽然是重量的取样方式,而非个体取样,但也可以认为是品种间的差异。从理论上说胚蛋白可以用于杂交稻种子鉴定和纯度检测。

2、利用IEF技术对3个杂交组合及其三系种子醇溶蛋白和胚蛋白进行了分析。试验结果显示:不同杂交组合及其三系醇溶蛋白和胚蛋白间谱带差异明显,可将同一杂交组合及三系以及不同的杂交组合及三系区分开来。

3、对4个杂交组合及其三系种子的盐溶蛋白进行了SDS-PAGE分析。结果显示:盐溶蛋白的多态性丰富,三系及F1种子的谱带类型基本相同,但彼此间在谱带数目、宽窄、颜色深浅均有明显差异。

参考文献

[1]Development of a microsatellite framework map providing genome-wide coverage in rice（Oryza sativa L.）[J].X.Chen,S.Temnykh,Y.Xu,Y.G.Cho,S.R.McCouch.TAG Theoretical and Applied Genetics.1997(4)

[2]Direct comparison of levels of genetic variation among barley accessions detected by RFLPs,AFLPs,SSRs and RAPDs[J].J.R.Russell,J.D.Fuller,M.Macaulay,B.G.Hatz,A.Jahoor,W.Powell,R.Waugh.TAG Theoretical and Applied Genetics.1997(4)

[3]Isolation and characterisation of microsatellites from hexaploid bread wheat[J].G.J.Bryan,A.J.Collins,P.Stephenson,A.Orry,J.B.Smith,M.D.Gale.TAG Theoretical and Applied Genetics.1997(5)

[4]Development of AFLP markers in barley[J].X.Qi,P.Lindhout.MGG-Molecular&General Genetics.1997(3)

[5]张凤.杂交水稻种子纯度电泳鉴定技术的研究[D].福建农林大学,2005.