丹参酚酸B的制备和药理活性研究

背景及概述^[1]

丹参的化学成分包括两大类：一是以丹参酮II A为代表的脂溶性菲醌类化合物；二是以 丹参酚酸B为代表的水溶性酚酸类化合物。现代药理研究已经证明丹参酚酸B具有广泛的药理活性，比如，可以抗氧化作用，清除 氧自由基、抑制脂质体过氧化反应，可以提高SOD的活性，抑制氧自由基对心肌的损伤作用， 减轻缺血再灌注损伤；还可以减轻钙超载，使心肌缺血细胞内的钙镁ATP酶活性下降；同时 还有抑制血管损伤促进细胞内NO的合成，清除细胞内活性氧；同时还具有抗炎作用，降低 内皮细胞间黏附因子的表达。

制备^[2]

水提取(浸渍法)：取丹参粉碎可过三号筛，称50Kg，按其重量的20倍量加纯水，室温浸泡4小时并适当搅拌，分离提取液，残渣按原丹参重量的10倍加水，室温浸泡6小时并适当搅拌，分离提取液。合并两次提取液，用过滤方法去除其中的固体杂质。

在上述提取液中加入抗氧剂亚硫酸氢钠，亚硫酸氢钠的用量为提取液体积的0.005％。静置6小时，溶液变混浊并逐渐出现沉淀，过滤去除沉淀，经HPLC测定，滤液中丹参酚酸B量为2.632Kg。

将上述滤液加至处理好的AB-8型大孔树脂柱，先用5个柱体积的酸水(用盐酸调pH＝2的纯水)洗柱，去除大部分未与大孔树脂结合的杂质，再用25％的乙醇水溶液洗5个柱体积，然后用40％乙醇洗脱5个柱体积，基本可将丹参酚酸B收集完全。最后用95％乙醇洗脱3个柱体积后用去离子水洗10-20个柱体积，再生柱子。

收集上述用40％乙醇洗脱时的流出液，在70℃、真空度-0.1Mpa的条件下减压脱醇浓缩至含药量5％左右，冷冻干燥，制得丹参酚酸B含量为95.45％的样品2.461Kg，丹参酚酸B回收率为89.25％。

药理作用研究^[3-4]

汤中杰等人验证了SOX2OT/miRNA（miR）-34a/SOX2信号轴对人大肠癌LOVO细胞侵袭转移的影响以及丹参酚酸B（SalB）通过该信号轴浓度依赖性抑制LOVO细胞侵袭转移。方法:双荧光素酶报告基因检测SOX2OT与miR-34a、miR-34a与SOX2的靶向结合;瞬时转染SOX2OT质粒和miR-34a mimic至LOVO细胞,RT-qPCR验证转染效率;RT-qPCR、Western blot检测SOX2OT、miR-34a与SOX2三者表达的相关性;划痕实验、Transwell实验检测SOX2OT/miR-34a/SOX2轴对LOVO细胞侵袭迁移的影响;MTT法检测丹参酚酸B对LOVO生长抑制作用;RT-qPCR检测低、中、高浓度丹参酚酸B处理下SOX2OT的表达;划痕实验、Transwell实验检测低、中、高剂量丹参酚酸B作用时细胞侵袭迁移情况。结果:LOVO细胞中SOX2OT与miR-34a、miR-34a与SOX2之间存在靶向结合;SOX2OT抑制miR-34a,上调SOX2;miR-34a可下调SOX2OT和SOX2表达;miR-34a逆转SOX2OT对细胞侵袭和迁移能力的增强作用;在一定浓度范围内丹参酚酸B量效相关性抑制LOVO细胞生长;丹参酚酸B浓度依赖性抑制LOVO细胞SOX2OT表达;丹参酚酸B抑制LOVO细胞侵袭转移,且随着浓度增加,抑制作用增强。结论:SOX2OT/miR-34a/SOX2信号轴与LOVO细胞侵袭转移密切相关,丹参酚酸B通过抑制该信号轴量效相关性抑制LOVO细胞侵袭转移。

郭飘婷等人验证了丹参酚酸B（Salvianolic acid B,SalB）抑制人大肠癌细胞HCT-116增殖并促进其凋亡,进一步通过活性氧簇（Reactive oxygen species,ROS）阐述其可能机制。方法：体外培养大肠癌细胞HCF-116,分成HCT-116组、HCT-116+H2O2组、HCT-116+SalB组、HCT-116+SalB+N-乙酰-L-半胱氨酸（N-acetylcysteine,NAC）组。分组干预后,采用MTT法检测细胞存活率、平板克隆实验检测细胞增殖、流式细胞术检测ROS含量、细胞周期及细胞凋亡率。结果：SalB对HCT-116细胞具有抑制作用,且在一定浓度范围内呈正相关（P<0.01）;SalB、H2O2促进HCT-116细胞内ROS生成（P<0.01）,ROS清除剂NAC预处理可清除由SalB产生的ROS（P<0.01）;SalB抑制HCT-116细胞增殖（P<0.01）并促进其凋亡（P<0.01）,该作用可被NAC部分逆转（P<0.05）;SalB引起HCT-116细胞G0/G1周期阻滞（P<0.01）,NAC预处理完全逆转SalB导致的周期阻滞（P<0.05）。结论：SalB可通过增加HCT-116细胞内ROS水平引起细胞周期阻滞,从而抑制细胞增殖,并促进其凋亡。

参考文献

[1] [中国发明] CN201410102854.0 一种化学合成丹参酚酸B及其类似物的方法

[2] [中国发明,中国发明授权] CN200510104412.0 一种制备丹参酚酸B的方法

[3]汤中杰,汪鑫,郭飘婷.丹参酚酸B靶向SOX2OT/miRNA-34a/SOX2轴抑制大肠癌细胞侵袭转移[J].中国中西医结合消化杂志,2021,29(02):97-104.

[4]郭飘婷,闵丽,陈建军,汪鑫,倪思忆.丹参酚酸B调控ROS抑制大肠癌细胞HCT-116增殖并促进其凋亡[J].实用肿瘤学杂志,2020,34(06):504-510.