苯酚的含量测定方法

背景及概述^[1]

苯酚(Phenol，CHOH)是是生产某些树脂、杀菌剂、防腐剂以及药物(如阿司匹林)的重要原料，也可用于消毒外科器械和排泄物的处理，还可以用于皮肤杀菌、止痒和中耳炎等，具有广泛的应用范围。

在生物制品的制备过程中，苯酚是一种优良的杀菌剂，其作用机理为苯酚能够裂解并穿透细胞壁，与菌体蛋白结合，引起蛋白变性，进而实现菌体的灭活。然而，由于苯酚毒性较大，苯酚在生物制品中对生物制品的质量也会产生一定的影响，因此在中间产品加工为成品之前需要对中间产品中的苯酚含量加以测定。

含量测定^[1]

一种高效液相色谱检测生物制品中苯酚含量的方法，包括以下步骤：

①样品制备：量取适量生产批号为A20170702的A群脑膜炎多糖溶液，用孔径为0.45μm的滤膜过滤，得到样品；

②仪器检查：按洗脱的初始体积比将流动相A和流动相B接入高效液相色谱仪的C色谱柱中平衡，检查高效液相色谱仪的各个系统，确保仪器正常，其中，流动相A为1.0‰TFA-乙腈溶液，流动相B为1.0‰TFA-水溶液；

③检测前准备：设置高效液相色谱仪的色谱条件，其中，压力警戒为3.5bar、检测波长为280nm、流速为1.0mL/min、进样量为40μL、柱温为24℃；随后继续按初始体积比将流动相A和流动相B接入C色谱柱中，直至C色谱柱内的各物质含量达到动态平衡；

其中，对于流速和进样量的选择，进行了无数次摸索试验，其中在流速为0.5-1.0mL/min、进样量为40-100μL时色谱峰峰形良好。

④苯酚洗脱：将步骤①中得到的样品加入至步骤③中已平衡的C色谱柱中，按流动相A和流动相B之间的体积比的不同分成七个洗脱阶段，依次对样品中的苯酚进行梯度洗脱，记录色谱图，随后经分析计算得出样品中苯酚的吸收峰面积为230.43；

其中，上述的七个洗脱阶段按体积百分数计，见下表1所示依次进行梯度洗脱：

⑤绘制线性回归方程：精密量取分别精密量取40μL的浓度依次为0μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL、100μg/mL的苯酚标准溶液作为标准对照液，将各组标准对照液分别按照步骤④中的七个洗脱阶段进行梯度洗脱，记录色谱图，测得标准对照液的吸收峰面积，最后以标准对照液浓度为横坐标、以吸收峰面积为纵坐标制作的线性回归方程，具体为Y＝27.8037x+59.6158，线性相关系数r＝0.99993，呈良好线性关系，当样品中的苯酚超过此线性范围时，可适当加大样品的稀释倍数。

⑥苯酚含量测定：将步骤④所得的苯酚的吸收峰面积代入步骤⑤中线性回归方程中，计算得到样品中苯酚的含量为6.1436μg/mL。

参考文献

[1] [中国发明] CN201811192272.0 一种高效液相色谱检测生物制品中苯酚含量的方法