你真的了解考马斯亮蓝吗

1、考马斯亮蓝有G-250和R-250两种。

考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，光吸收在465nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比。其中考马斯亮蓝G-250由于与蛋白质的结合反应十分迅速，常用来作为蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝R-250与蛋白质反应虽然比较缓慢，但是可以被洗脱下去，所以可以用来对电泳条带染色。

2、Bradford定量。

蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定。该法是1976年Bradford建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg/mL，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。

3、考马斯亮蓝溅到皮肤怎么办？

考马斯亮蓝和皮肤中蛋白质通过范德华力结合，反应快速，并且稳定，无法用普通试剂洗掉。待一两周左右，皮屑细胞自然衰老脱落即可无碍。

4、各种蛋白染色方法的灵敏度比较。

5、如何加快染色和脱色速度。

（1）染色和脱色都可以在微波炉中加热甚至煮沸，很省时间。但注意不要沸腾时间太长，否则容易把胶上煮出泡状的破损。（2）若为了提高考染及脱色速度，可在45℃左右的水浴中进行，染色时间只需几分钟（其间轻轻晃动一二次，整个胶变为较深的亮兰色即可）。脱色也在水浴中（约需15分钟）（3）胶放入用乙醇-乙酸配成的脱色液后微波加热10秒钟至微热,上摇床,10分钟后,倒掉,换新的脱色液重复一次,不超过半个小时也好了.（4）用乙醇和乙酸配脱色液,然后加热脱色，很快的，可加热到马上要沸腾为止。不但脱色可以，染色也可加热，速度也很快（5）用蒸馏水洗胶，并放在微波炉里加热，效果很好。只是要掌握好时间，时间太长而蛋白的含量又比较低的话，容易脱过了！（6）加入甲醇－乙酸脱色液后，将其直接放到微波炉里加热一分钟，然后放几张干净的tissue进去（把它叠成条状，沾在脱色皿边上就OK啦!(不要和胶混在一起）)，能吸去很多染料，加快脱色，效果不错。

6.注意问题。

（1）胶脱色不能脱的太久，虽然越脱越清楚，但脱的太久了，弱带就看不见了，胶也会变的失真，这样的胶照出的照片是很难被接受的。如果样品条带或点不是很浓，就不可以脱太久。但如果要拍照，最起码要保证底色脱完全，要不然照片效果也不会好的。（2）如果需要长时间脱色，注意要换脱色液,且量要足够,否则甲醇挥发很快,胶容易干卷.把本底脱干净后可以把胶放水中保存.半个月应该没问题；长期保存可以在水中加20%的甘油。也有同行经验：考染不能长时间保存，尤其是在水里，3天颜色就会溶到水里。具体情况要自己摸索了。