ANIMAL BLOOD DIRECT PCR KIT 全血直接PCR试剂盒的应用

背景^[1-3]

ANIMAL BLOOD DIRECT PCR KIT全血直接PCR试剂盒可以直接对全血样本进行PCR，无需进行DNA纯化或样品预处理，大大降低了污染风险，缩短时间和节约支出。

试剂盒中包含2×Blood Master Mix，其中的血液DNA聚合酶专为全血DNA直接扩增而设计，对全血样品中的PCR抑制剂具有超强的抵抗力，可扩增全血浓度高达40%。高度优化的反应体系使得Blood direct PCR Kit能够从全血样品中高效扩增长达7.5 kb的基因组片段。

2×Blood Master Mix：包含Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、MgCl2、PCR反应增强剂、优化剂以及稳定剂等，产品已混合溴酚蓝染料（不含SDS），PCR产物可以直接进行电泳。

ANIMAL BLOOD DIRECT PCR KIT全血直接PCR试剂盒可用于直接扩增的血样类型包括：新鲜血液、4℃贮存血液、冷冻血液且兼容所有常规抗凝剂(EDTA、柠檬酸盐、肝素等)。Blood Direct PCR Kit已经在许多哺乳动物物种上进行了成功测试，并成功扩增了几种禽类全血。

PCR反应体系配制：a）模板使用量：进行基因组上的目的片段检测，建议使用少量的血液量作为模板；检测血液样本中某种病毒或细菌等的目的片段，建议扩大PCR体系并使用较大量的血液模板。血液模板Z多占PCR体系的45%（人血）、20%（鼠血）。若模板使用含有血液的采集卡，可截取直径1-4 mm的血点，直接加入20-50μL PCR反应体系进行扩增。

b）引物浓度：通常引物终浓度为0.2μM，也可以根据情况在0.1-0.5μM之间进行调整。

c）反应体系：推荐使用20μL或50μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

d）体系配制：配制好PCR反应体系，置于涡旋仪上涡旋混匀，瞬时离心将反应液集于管底。

应用^[4][5]

用于基于血液样品和微流控芯片技术的细胞分离、PCR扩增及DNA测序方法研究

微流控芯片技术作为微流控分析系统的核心部分已发展成为μTAS中最活跃的领域,血液是一种重要的生物分析样本,含有极其丰富的有关体内所有组织和器官功能的信息,因此对血液样品进行分析是医学和科学领域研究关注的焦点。

用微流控芯片技术设计制作了细胞水平和DNA水平上对人血液进行分析的芯片,实现了利用高梯度磁分离技术对未经标记的血细胞进行直接分离、直接全血PCR扩增及流动焦磷酸测序法人血液DNA的SNP位点检测,展示了微流控芯片在生物分析中的发展潜力。

在直接全血PCR扩增方法研究及其在静态微池型PCR芯片上的应用中,是在DNA水平上应用扩增技术进行血液分析微流控芯片的研究。首先通过将改进的PCR程序和优化的PCR反应体系结合起来进行直接全血PCR扩增,成功的进行了血液内源基因P53片段（大约543 bp）和外源的靶目标λDNA片段（大约500 bp）的扩增。

此方法还可应用于不同处理的血液样品,如不同抗凝剂（和柠檬酸钠）血液、未加抗凝剂的新鲜血液、滤纸上的血斑等。然后在自制的静态微池型PCR芯片上,利用此PCR扩增方法也成功的实现了芯片上的直接全血PCR扩增,PCR扩增得到两个不同长度的血液内源靶目标P53基因和K-ras基因（157 bp）片段,在10μL的反应体系中只需加入0.5μL的血液,此PCR芯片是采用ITO玻璃为基底,用模糊PID算法来控制芯片的温度程序,芯片加热器的有效面积是25×25 mm,一个聚乙烯管粘在玻璃面上做为PCR反应池。在整个过程中,仅涉及芯片加热程序,因此所做的PCR芯片可适用于野外检测等。

参考文献

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[2]A thermostat chip of indium tin oxide glass substrate for static polymerase chain reaction and in situ real time fluorescence monitoring[J].Zhi-Yong Wu,Kun Chen,Bai-Yan Qu,Xiao-Xi Tian,Xiao-Jie Wang,Fang Fang.Analytica Chimica Acta.2008(1)

[3]An integrated genetic analysis microfluidic platform with valves and a PCR chip reusability method to avoid contamination[J].Ranjit Prakash,Karan V.I.S.Kaler.Microfluidics and Nanofluidics.2007(2)

[4]Polymerase chain reaction/ligase detection reaction/hybridization assays using flow-through microfluidic devices for the detection of low-abundant DNA point mutations[J].Masahiko Hashimoto,Francis Barany,Steven A.Soper.Biosensors and Bioelectronics.2006(10)

[5]渠柏艳.基于血液样品和微流控芯片技术的细胞分离、PCR扩增及DNA测序方法研究[D].东北大学,2009.