肝素锂制备方法

背景技术

肝素，在临床血液检验中以钠盐和锂盐为常见，具有独特的应用价值，肝素螯合力低，对水分子运动的影响小，对血液成分干扰少，不影响红细胞体积，不引起溶血，所以在多种以全血或血浆为标本的检验中，推荐使用肝素作为抗凝剂。适用于红细胞脆性试验、血气分析、红细胞压积实验、血流变及急诊生化测定。在对Ph值、血气、电解质和钙离子的检测中，肝素是唯一可以使用的抗凝剂，而肝素锂在检测非锂离子时产生干扰的可能性最小，所以推荐使用肝素锂作为抗凝剂，目前在血液检验中，肝素锂正在逐步取代肝素钠。

肝素锂的制备，目前国内专利200510019846. 0公开了离子平衡交换法制备肝素锂，该法部分工艺环节需要低温条件（10℃以下）操作，对物料及环境温度控制要求较高， 硬件设施投入较大；该法在去蛋白工艺环节采用强酸性条件操作（PH1.5)，对肝素活性损失较大（肝素溶液在低PH值环境下很不稳定，极易降解失活），影响最终活性收率和效价， 可操作性不强；该法采用超滤浓缩分离技术，超滤设备昂贵，硬件投入较大；该法采用的离子平衡交换方式，是以高浓度锂离子不断介入的方式来实现肝素钠向肝素锂的转换，无法保证动态离子平衡转换的充分性和连续稳定性。国外制备肝素锂均采用离子交换法，该法需要选用精品肝素钠为原料，原料成本高，而且在离子交换过程中可引起PH急剧下降，严重影响产品的收率和效价，并且交换过程需要在低温提条件下进行，导致肝素锂生产硬件设施投入较大，生产成本较高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种肝素锂制备方法，以解决上述问题。

本发明的技术方案为：肝素锂制备方法，它是以下列步骤制备：

1、粗品肝素酶解：将粗品肝素钠溶解，调PH值为7. 5-9. 0，升温至50-55°C，加入肝素酶解胰酶，保温4-5小时，调PH值9. 0-11，升温至85°C〜90°C后，冷却，过滤去除沉淀物， 滤液用乙醇沉淀，收集沉淀物（A)；

2、去蛋白：步骤1所得沉淀物（A)用水溶解，搅拌，调PH至9-11，加入蛋白质絮凝沉淀剂，搅拌，静置，过滤去除沉淀，收集滤液（D)，滤液（D)调PH至11-13值，搅拌，静置，过滤去除沉淀，收集滤液（E)，滤液（E)调PH值至中性，用乙醇沉淀，收集沉淀物（B)；

3、氧化脱色：将步骤2所得沉淀物（B)用水溶解，用过氧化氢氧化24-48小时，调整PH至10. 5-11. 5后，过滤去除沉淀物，收集滤液（F)，滤液（F)调PH值至6. 5-7. 5，用乙醇沉淀，收集沉淀物（C)；

4、树脂交换：将步骤3所得沉淀物（C)用水溶解，加入LiCl，搅拌溶解，通过树脂柱进行离子交换，收集过柱流出液，得肝素锂溶液；

5、沉淀、脱水、干燥：将步骤4所得肝素锂溶液，过滤，用乙醇沉淀，收集沉淀物(G)，沉淀物（G)脱水，然后真空干燥，粉碎，得肝素锂精品。

步骤1中，所述肝素酶解胰酶选用胰蛋白酶、含胰蛋白酶的复合胰酶、中性胰蛋白酶、碱性蛋白酶中的一种或含两种以上的组合。

步骤2中，所述蛋白质絮凝沉淀剂选用聚丙烯酸钠、聚合氯化铝、聚丙烯酸钙、聚合氯化铝、氯化钙中的一种或含两种以上的组合。

所述步骤5中，所述沉淀物（G)脱水是用无水乙醇实施脱水。

所述步骤1中，所述粗品肝素钠溶解是：用NaCL溶液将粗品肝素钠原料溶解，粗品肝素钠溶液质量浓度为8%-16%。

所述步骤1中，在粗品肝素钠溶液中加入肝素酶解酶的质量百分比是粗品肝素钠溶液质量的0. 1-0.3%。

所述步骤4中，沉淀物（C)的水溶液的质量百分比浓度是8 % -20 % ;在沉淀物（C) 的水溶液中加入的氯化锂的质量百分比是沉淀物（C)水溶液质量的I. 5% -8. 5% ;所用树脂为离子型交换树脂。

所述粗品肝素钠是市售商品原料,效价为65-105IU/mg不等。

本发明，以粗品肝素钠为原料，原料来源广泛，成本较低。此外，本发明，硬件设施投入小，环境温度要求不高，可实现工艺全程的常温条件下操作（除局部需要短时间加热的环节外），树脂法动态离子交换过程温和，不会有活性损失，回收率达到95%以上，产品效价达到160IU/mg以上。

具体实施方式

步骤1:用1% -3%的NaCL溶液将粗品肝素钠原料（市售商品原料，效价 65-105IU/mg不等）搅拌溶解，粗品肝素钠浓度为8%-16% (质量百分比浓度），用5M的 NaOH溶液调PH至7. 5-9. 0，升温至50-55°C，按粗品肝素钠溶液质量的0. 1-0. 3%加入肝素酶解胰蛋白酶，保温4-5小时，用5M的NaOH溶液调PH值至9. 0-11，升温至85°C〜90°C，冷却到常温，过滤去除沉淀物，滤液用0. 8-1. 5倍体积95%的乙醇沉淀4小时以上，收集沉淀物A ;

步骤2 :将沉淀物A用纯水搅拌溶解，溶解浓度为10% -20% (质量百分比)，用 5M的NaOH溶液调PH至8. 5-11，按沉淀物A水溶液质量的0. 1% -5%加入蛋白质絮凝沉淀剂氯化钙，搅拌1-2小时，静置1小时以上，过滤去除沉淀，收集滤液，用5M的NaOH(或碳酸钠）溶液调PH值至11-13，搅拌均匀，静置30分钟以上，过滤去除沉淀，收集滤液，用6M的 HCL溶液调PH值至中性，用0. 8-1. 5倍体积的95%乙醇沉淀4小时以上，收集沉淀物B ；

步骤3 :将沉淀物B用纯水溶解，溶解浓度为15% -30% (质量百分比浓度)，按沉淀物B水溶液质量的1%〜4%加入纯度为30%的过氧化氢（可以分次加入），氧化24-48 小时，用5M的NaOH溶液调整PH至10. 5-11. 5，过滤去除沉淀物，收集滤液，用6M的HCL溶液调PH值至6. 5-7. 5，用0. 8-1. 5倍体积的95%乙醇沉淀4小时以上，收集沉淀物C ；

步骤4 :将所得沉淀物C用纯水溶解，溶解度为8% -20% (质量百分比浓度)，再按沉淀物C溶液质量的1. 5% -8. 5%加入氯化锂，搅拌溶解，通过已再生转型好的离子型树脂柱进行离子交换，交换流速10BV/h以下，收集过柱流出液，并用1-2倍量的纯水通柱，合并流出液，得肝素锂盐溶液；

步骤5 :将所得肝素锂盐溶液，过滤，用0. 8-3倍体积的95%乙醇沉淀4小时以上， 收集沉淀物，用无水乙醇脱水两次，然后真空干燥，粉碎，得肝素锂精品。