红细胞进白细胞出-红细胞裂解液
发布日期:2021/1/18 13:59:59
红裂液的使用在动物试验中极其频繁，其与PBS、生理盐水、细胞培养基，并称实验室四大液体耗材。然而红裂液是如何达到裂解红细胞但是又不破坏其他有核细胞效果的呢，作为一个不关心实验原理，自己也不配红裂液的实验小白不禁心有疑虑。
首先我们一起来看看红裂液的配方，实验室常用自配红裂液的主要成分为:碳酸氢钾（1g），氯化铵（8.3g）以及EDTA.2Na（0.037g），最终用KOH和HCl调节PH值至7.2-7.4（此配方为配制1000ml红裂液）。然后消高压，4℃储存、备用。
由于EDTA.2Na的用量很小，如果称取0.037g必定会造成较大的称量误差，所以我往往会准备一瓶EDTA.2Na的储存液（0.37gEDTA.2Na溶于1000ml ddH2O中，每次配置1000ml红裂液时从中吸取100ml储存液）
接下来让我们看看配方中红裂液各个成分在裂解过程中的作用吧
氯化铵是红裂液中主要的效应物质，铵根离子不能透过细胞膜，而其他离子可以通过，这样就造成细胞内外离子浓度差异，形成了渗透压差，外部的水分会扩散至胞内，使细胞膨胀。由于红细胞结构相对简单，因此膨胀的耐受能力较差，绝大部分就会被涨破。碳酸盐的主要作用为PH缓冲。EDTA与镁离子和钙离子形成的螯合物主要起到破坏细胞膜稳态的作用，此作用对白细胞影响很小，所以这种裂解液可以在裂解红细胞的同时较小的影响白细胞。想要知道更多更细致的裂解原理。
红细胞裂解液的具体用法：
实验材料：C57小鼠的脾脏；
实验目的：分离脾脏中淋巴细胞，流式检测T细胞亚群。
2.1500rpm，4℃，离心5min，得到含有红细胞的细胞沉淀，吸弃上清
3. 每管中加入1ml的staining buffer，枪头吹打重悬后，加入9ml红裂液，盖上离心管盖，上下颠倒混匀后插入冰盒中。
4.裂解3min后离心，1500rpm，4℃，离心5min，得到裂解后的细胞沉淀。
5. 吸弃上清，用5ml staining buffer重悬（可以用涡旋仪涡一下），200目尼龙膜过膜。
6.1500rpm，4℃，离心5min（此步骤为清洗一遍细胞沉淀，去除多余的红裂液）。得到最终的细胞沉淀。
7. 2-3ml staining buffer重悬沉淀（具体重悬体积视团块大小而定）
8. 细胞计数（以上所有操作，可以在冰上操作的尽量在冰上操作）
细胞前期的处理当然是为了后面的细胞培养或者流式检测做准备的，所以让我们看看最后的成果怎么样吧！细胞状态还是不错哒，可以开心的进行的研究了。
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