NCI-H661人大细胞肺癌细胞的应用

背景^[1-3]

NCI-H661人大细胞肺癌细胞源自一43岁患有大细胞肺癌的男性白人的淋巴结。缺乏产生粘液和鳞状分化的亚显微结构和生化证据。其表达的p53 mRNA易于检测，明显高于正常肺细胞的水平，与此同时，没有出现总体性的结构DNA崎变，它们可以说明存在点突变或很小的变异。角蛋白和波形蛋白纤维染色阳性，神经丝三联体蛋白阴性。

操作步骤：

（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换8-10ml新鲜培养液后继续培养。

(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1.弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。

2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒放于37℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。如果没有特别说明，收到细胞后的初次传代一般是一传二。

应用^[4][5]

用于南美响尾蛇神经毒素（Crotoxin）诱导NCI-H661细胞凋亡机制研究

南美响尾蛇神经毒素（crotoxin,Cr TX）对人大细胞肺癌细胞体外培养抗肿瘤作用,以及对人大细胞肺癌细胞裸鼠移植瘤抗肿瘤作用,并探讨其相关作用机制。

方法:通过四唑盐还原法（CCK-8）检测南美响尾蛇神经毒素（crotoxin）、吉非替尼（Gefinitib）及两药联合应用对人大细胞肺癌NCI-H661细胞的生长抑制率,应用细胞集落平板克隆实验观察crotoxin、gefinitib及两药联合应用对NCI-H661细胞的集落形成的影响;应用流式细胞术检测crotoxin、gefinitib及两药联合应用对NCI-H661细胞周期及细胞凋亡率的影响,并检测以SB203580抑制p38活性,以PFT-α抑制wtp53的活性后NCI-H661细胞周期及细胞凋亡率的变化。

应用蛋白免疫印迹法（Western blot）测定crotoxin、gefinitib及两药联用对NCI-H661细胞内p38MAPK、wtp53、phospho-p38MAPK、bax、bcl-2及caspase-3活性亚单位p17蛋白表达水平影响,并测定以SB203580抑制p38活性,以PFT-α抑制wtp53的活性后crotoxin、gefinitib及两药联合应用对NCI-H661细胞内以上6种蛋白表达水平变化。

将人大细胞肺癌NCI-H661细胞接种裸鼠腋下建立荷瘤裸鼠模型。将荷瘤裸鼠随机分为6组,crotoxin组、gefinitib组、crotoxin+gefiniti组、crotoxin+SB203580组、crotoxin+PFT-α组和阴性对照组。实验组裸鼠腹腔注射给药,每三天给药一次,同时阴性对照组注射等量生理盐水。给药4周后完整取出皮下移植瘤结节,对比较不同干预组和对照组移植瘤瘤重,计算抑瘤率。

参考文献

[1]The Drosophila DUSP Puckered is phosphorylated by JNK and p38 in response to arsenite-induced oxidative stress[J].Katerina Karkali,George Panayotou.Biochemical and Biophysical Research Communications.2012(2)

[2]Critical role of hydrogen peroxide signaling in the sequential activation of p38 MAPK and eNOS in laminar shear stress[J].Free Radical Biology and Medicine.2012(6)

[3]Helicobacter pylori CagA inhibits the expression of Runx3 via Src/MEK/ERK and p38 MAPK pathways in gastric epithelial cell[J].ZhifangLiu,XiaXu,LongChen,WenjuanLi,YundongSun,JipingZeng,HanYu,ChunyanChen,JihuiJia.J.Cell.Biochem..2012(3)

[4]Angiotensin-（1–7）Inhibits Vascular Remodelling in Rat Jugular Vein Grafts via Reduced ERK1/2 and p38 MAPK Activity[J].J-G Wu,H Tang,Z-J Liu,Z-F Ma,A-L Tang,X-J Zhang,X-R Gao,H Ma.Journal of International Medical Research.2011(6)

[5]李睿.南美响尾蛇神经毒素(Crotoxin)诱导NCI-H661细胞凋亡机制研究[D].苏州大学,2015.