脱氧核糖核酸酶2抗体的应用

背景^[1-3]

脱氧核糖核酸酶2抗体是一类可以特异性结合脱氧核糖核酸酶2的多克隆抗体，主要用于检测脱氧核糖核酸酶2的免疫学实验。脱氧核糖核酸（DNA）是生物细胞内携带有合成RNA和蛋白质所必需的遗传信息的一种核酸，是生物体发育和正常运作必不可少的生物大分子。

脱氧核糖核酸酶即是DNA酶，灰色至类白色粉末。用于从蛋白样品中去除DNA，但无法水解紧密的核染色质。

脱氧核糖核酸（英文DeoxyriboNucleic Acid，缩写为DNA）是生物细胞内含有的四种生物大分子之一核酸的一种。

DNA携带有合成RNA和蛋白质所必需的遗传信息，是生物体发育和正常运作必不可少的生物大分子。

DNA由脱氧核苷酸组成的大分子聚合物。脱氧核苷酸由碱基、脱氧核糖和磷酸构成。其中碱基有4种：腺嘌呤（A）、鸟嘌呤（G）、胸腺嘧啶（T）和胞嘧啶（C）。

DNA分子结构中，两条多脱氧核苷酸链围绕一个共同的中心轴盘绕，构成双螺旋结构。

脱氧核糖-磷酸链在螺旋结构的外面，碱基朝向里面。两条多脱氧核苷酸链反向互补，通过碱基间的氢键形成的碱基配对相连，形成相当稳定的组合。

应用^[4][5]

用于旋毛虫新生幼虫脱氧核糖核酸酶Ⅱ表达及鉴定研究

通过筛选旋毛虫新生幼虫差减cDNA文库所获得的新生幼虫期特异性表达基因N5（基因库注册号为:AF331159）进行Interproscan检索,发现N5可能编码脱氧核糖核酸酶Ⅱ（DNaseⅡ）。

构建原核表达载体pET28a-N5。将重组质粒pET28a-N5放入表达菌E.coli BL21（DE3）。用IPTG在不同的表达条件（不同温度、IPTG浓度、细菌的OD值）对重组表达菌BL21（DE3）进行诱导,对菌体裂解物进行SDS-PAGE分析。结果显示:不同诱导条件下表达表达量不同。

利用尿素提取包涵体法提取不同条件下表达的包涵体。将包涵体分别溶于TE（Triscl-EDTA）、PBS（磷酸盐缓冲液）置于4℃冰箱中复性,然后用包涵体复性后的上清液对λDNA进行酶切分析,结果表明:复性后的包涵体上清液中的可溶蛋白具有较强的核酸酶活性。

通过对N5基因序列分析以及将N5同其他物种的脱氧核糖核酸酶Ⅱ基因进行比对,发现N5基因在基因水平上属于编码脱氧核糖核酸酶Ⅱ基因家族成员,并找出N5基因编码活性中心氨基酸和中心内关键氨基酸的碱基序列,通过PCR进行对编码关键氨基酸-组氨酸的密码子分别定点突变为编码赖氨酸和丝氨酸的密码子（突变后的基因分别命名为MC578A-29、MC578B-29）。

突变后,同样构建原核表达载体pET28a-MC578A-29、pET28a-MC578B-29,进行诱导表达和酶活性测定,发现突变后所编码的蛋白通过溶于PBS,4℃进行复性,复性后上清液中的可溶蛋白核酸酶活性明显下降或丧失。

说明:活性中心的分析和定点突变位置的选择是正确的。对N5和MC578A-29、MC578B-29表达产物在不同条件进行酶活分析,证明该N5基因编码的脱氧核糖核酸酶具有DNaseII的特性。

参考文献

[1]Role of DNA in Bacterial Aggregation[J].Hui-Hui Liu,Yi-Ran Yang,Xin-Cheng Shen,Zhi-Ling Zhang,Ping Shen,Zhi-Xiong Xie.Current Microbiology.2008(2)

[2]Tissue distribution of neutral deoxyribonuclease(DNase)activity in the mussel Mytilus galloprovincialis[J].Comparative Biochemistry and Physiology,Part B.2007(3)

[3]Characterization and tissue distribution of multiple agouti-family genes in pufferfish,Takifugu rubripes[J].Tadahide Kurokawa,Koji Murashita,Susumu Uji.Peptides.2006(12)

[4]DNase II deficiency impairs innate immune function in Drosophila[J].Chang-Soo Seong,Armando Varela-Ramirez,Renato J.Aguilera.Cellular Immunology.2006(1)

[5]龙民慧.旋毛虫新生幼虫脱氧核糖核酸酶Ⅱ表达及鉴定[D].吉林大学,2005.