人B细胞活化因子受体(BAFF-R)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人B细胞活化因子受体(BAFF-R)ELISA KIT采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

原理：用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗该指标抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗该指标抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成的黄色。颜色的深浅和样品中的该指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

操作步骤:

1）使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

2）根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。

3）加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。

4）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

5）每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

6）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

7）每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。

8）取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

9）在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于BLyS及受体BAFF-R水平在类风湿关节炎中的意义研究

检测类风湿性关节炎（RA）患者外周血B淋巴细胞刺激因子（BLyS）及B淋巴细胞表面表达的B淋巴细胞刺激因子受体（BAFF-R）水平,并探讨两者之间的相关性以及两者与DAN积分、血沉（ESR）、C反应蛋白（CRP）、类风湿因子（RF）、抗环瓜氨酸肽抗体（ACCP）、免疫球蛋白（Ig）等炎症指标的相关性。指导治疗效果的评价,为进一步揭示RA发生发展的机制提供线索,探讨它们的临床应用价值。

方法:整理30例RA患者及20例健康体检者的临床资料。取RA患者外周抗凝血,经过荧光标记后流式细胞仪检测B淋巴细胞表面BAFF-R的表达率,用酶联免疫吸附（ELISA）方法检测血清BLys,并检测患者治疗后BAFF-R及血清BLyS水平,同时收集患者治疗前DAS积分、ESR、CRP、RF、ACCP、Ig等数据进行相关性分析,结果经SPSS统计软件进行检验。

结果:1.RA患者血清BLyS水平较正常对照组比较有统计学差异,P<0.05。

2. RA患者B淋巴细胞表面BAFF-R（%）水平较正常对照组比较有统计学差异,P<0.05。

3. RA患者血清BLyS水平与B淋巴细胞表面BAFF-R（%）水平呈正相关,P<0.05。

4. RA患者血清BLyS水平在治疗前后比较有统计学差异,P<0.05。5.RA患者B淋巴细胞表面BAFF-R（%）水平在治疗前后比较有统计学差异,P<0.05。

6.RA患者B淋巴细胞表面BAFF-R（%）水平与DAS积分、血清免疫球蛋白G（IgG）、ESR、CRP、RF、ACCP水平正相关,P<0.05;与病程、晨僵时间、血清免疫球蛋白A（IgA）、血清免疫球蛋白M（IgM）无相关性,P>0.05。

参考文献

[1]TACI,an enigmatic BAFF/APRIL receptor,with new unappreciated biochemical and biological properties[J].Fabienne Mackay,Pascal Schneider.Cytokine and Growth Factor Reviews.2008(3)

[2]Signaling Pathways for B Cell-Activating Factor（BAFF）and a Proliferation-Inducing Ligand（APRIL）in Human Placenta[J].Daudi L.Langat,David A.Wheaton,Jeralyn Sue Platt,Travis Sifers,Joan S.Hunt.The American Journal of Pathology.2008(5)

[3]B lymphocytes as therapeutic targets in systemic lupus erythematosus[J].Hasler,Zouali.Expert Opinion on Therapeutic Targets.2006(6)

[4]BAFF,APRIL and their receptors:Structure,function and signaling[J].Claudia Bossen,Pascal Schneider.Seminars in Immunology.2006(5)

[5]李媛.BLyS及受体BAFF-R水平在类风湿关节炎中的意义[D].天津医科大学,2009.