人17羟皮质类固醇(17-OHCS)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人17羟皮质类固醇(17-OHCS)ELISA KIT用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中人17-羟皮质类固醇（17-OHCS）的含量。

人17羟皮质类固醇(17-OHCS)ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人17-羟皮质类固醇(17-OHCS)水平。用纯化的人17-羟皮质类固醇(17-OHCS)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入17-羟皮质类固醇(17-OHCS),再与HRP标记的17-OHCS抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的17-羟皮质类固醇(17-OHCS)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人17-羟皮质类固醇(17-OHCS)浓度。

操作步骤

1。从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2。设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3。样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4。除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5。弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6。每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7。每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于若干同证疾病（伴或不伴抑郁）部分炎症及HPA轴相关指标的对照研究

选取年龄18-65岁,性别不限,现代医学诊断为BA.COPD和NSCLC的患者；选取中医辨证为肾阳虚证及非肾阳虚证并进行抑郁分型；

另选取年龄、性别匹配,无呼吸系统疾病的健康人群和单纯抑郁症人群作为对照组。同时排除合并肺部其他疾病的患者；一个月内使用糖皮质激素治疗的患者；一个月内接受手术或放化疗等治疗的患者。

在固定时间点采集所有研究对象外周血、诱导痰、唾液、24h尿液,用酶联免疫法（Enzyme-labeled immunosorbent assay,ELISA）和Bio-Plex悬液芯片检测痰上清液和血清中C反应蛋白（C-reactive protein,CRP）、总IgE（Total immunoglobulin E,tIgE）、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白（Eosinophil cationic protein,ECP）、白介素(Interleukin,IL-6、肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factor,TNF-α）、转化生长因子（Transforming growth factor,TGF-β）、干扰素（Interferon,IFN）-γ水平等,观察患者炎症指标变化情况；同时用放免法检测血及唾液皮质醇、促肾上腺皮质激素（Adrenocorticoticotropic hormone,ACTH）、促肾上腺皮质激素释放激素（Corticotrophin-releasing hormone,CRH）;用放免法检测24h尿游离皮质醇（urinary free cortisol,UFC）、24h尿17-羟皮质类固醇（尿17-羟）、尿17-酮类固醇（尿17-酮）等指标,评估HPA轴功能水平。

参考文献

[1]The eosinophil and airway remodelling in asthma[J].PerVenge.The Clinical Respiratory Journal.2010

[2]Anti-inflammatory effect of leaves of Eriobotrya japonica correlating with attenuation of p38 MAPK,ERK,and NF-κB activation in mast cells[J].Sang-Hyun Kim,Tae-Yong Shin.Toxicology in Vitro.2009(7)

[3]The cytokine network in asthma and chronic obstructive pulmonary disease[J].Barnes,Peter J.Journal of Clinical Investigation.2008(11)

[4]Regulatory T Cells in Allergy and Asthma[J].Mark Larché.Chest.2007(3)

[5]杜懿杰.若干同证疾病（伴或不伴抑郁）部分炎症及HPA轴相关指标的对照研究[D].复旦大学,2012.