无外泌体胎牛血清的制备和应用

背景及概述^[1-2]

无外泌体胎牛血清适用外泌体研究，无支原体，无内毒素。胎牛血清（Fetal Bovine Serum, FBS）是大多数细胞培养重要的生长支持物。天然来源的FBS会含有大量的外泌体（exosome）等囊泡（Extracellular Vesicles）成分。由于FBS来源的外泌体会对研究结果产生巨大干扰，因此，外泌体研究时必须使用去除外泌体后的FBS进行细胞培养。

细胞在正常含血清的培养基中培养一定的时间后，细胞融合度约为 60%-70%时，移去原有含血清的培养基，换成新鲜的无外泌体胎牛血清，继续培养 48h 左右，细胞融合度达到80%-95%左右时收取上清,该上清液即可用于提取外泌体。

制备^[1]

无外泌体胎牛血清的制备：用0.22um的滤膜过滤胎牛血清，滤液置于超高速离心管中，4℃，120000g超高速离心90min，收集上清液。

应用^[2]

无外泌体胎牛血清可用于犬MSC来源外泌体的分离：用10％无外泌体胎牛血清、1％双抗、1％L-谷氨酰胺和88％DMEM基础培养基配制完全培养基，以制得的完全培养基传代培养MSC，取第3-5代收集上清在4℃，300g离心10min除去死细胞；收集上清后在4℃，16500g离心20min除去细胞碎片；收集上清后用0.22um的滤膜过滤；收集上清后在4℃，120000g超高速离心90min；去上清后，用生理盐水重悬沉淀，再次以4℃，120000g超高速离心90min；去上清后，用生理盐水重悬沉淀，收集悬液即为犬MSC外泌体制剂。

参考文献

[1]无外泌体胎牛血清使用说明

[2]CN201711449491.8一种犬MSC外泌体制剂及其制备方法