IMDM(含双抗)的注意事项和使用步骤

背景及概述^[1]

IMDM(含双抗)是含有青霉素-链霉素混合液的IMDM培养基。IMDM（Iscove’s Modified Dulbecco Medium）即Iscove改良的DMEM培养基，是Guilber 和Iscove在1976年设计的，用以培养红细胞前体细胞和巨噬细胞。青霉素-链霉素混合液通常也被称为“双抗”，是体外培养中为预防微生物污染最常用的抗生素，其中，青霉素能够干扰细菌细胞壁的合成，对革兰阳性菌特别有效；而链霉素能够与细菌核糖体30S亚单位结合，抑制细菌蛋白质的合成，对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均有效，但对革兰氏阴性菌特别有效。青霉素和链霉素联合使用可以预防绝大部分的细菌污染。

本产品含有多类细胞培养所需的氨基酸、维生素、无机盐等多种成分，但不含蛋白质、脂类或任何生长因子，故此产品需搭配血清或无血清添加物使用。

注意事项^[1]

1、培养基长期放置，需要2-8℃避光保存，请勿低温冻存。

2、培养基中添加的L-谷氨酰胺在溶液中不稳定、易分解，长期放置后使用若发现细胞生长变慢可在使用前加入适量的L-谷氨酰胺，来维持细胞的正常代谢。

3、含有NaHCO₃的培养基开瓶次数较多后，培养基内的CO₂会逐渐溢出，PH值上升，培养基的颜色会偏紫色。培养基偏碱性会造成细胞生长停滞或死亡，建议分装成小瓶使用或用HEPES调至正常PH范围。

4. 本产品仅供科研使用，不适用于临床。

IMDM(含双抗)使用步骤^[1]

（一）准确称量试剂：根据不同的菌类和用途，选择适宜的培养基，培养基所需试剂必须纯净。

（二）校正pH值：将称量好的培养基各种成分放入容器内，标记划线，加热溶解，补充水分，测定酸碱度，常用pH6.8～8.0的精密试纸或酸度计测定。用1N NaOH和1N HCl调节pH值到适宜范围内。

（三）过滤：将玻璃漏斗置铁架上，再用IMDM(含双抗)纱布夹棉花或用滤纸放在漏斗中，将上述培养基倒入其中过滤至透明。

（四）分装：将过滤后的培养基分装于中试管或三角瓶内（试管内每支装5mL；三角瓶中装100～150ml），塞好棉塞用牛皮纸包扎好，准备灭菌。

（五）灭菌：培养基的灭菌，常用高压蒸汽灭菌法。一般微生物的营养细胞在水中煮沸后即被杀死，但细菌的芽胞有较强的抗热性，须经高压蒸汽灭菌才能达到彻底灭菌的目的。根据蒸汽温度随压力升高而上升的原理，即压力越大，蒸汽温度就越高。因此，在同一温度条件下，采用高压蒸汽灭菌比干热灭菌法效果要好。而且在湿热情况下，菌体吸收水分后，其蛋白质易于凝固变性，因为蒸汽的穿透力强，杀菌效果好。

参考文献

[1] IMDM(含双抗)使用说明