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IMDM(含双抗)的注意事项和使用步骤

发布日期:2020/10/29 13:27:29

背景及概述[1]

IMDM(含双抗)是含有青霉素-链霉素混合液的IMDM培养基。IMDM(Iscove’s Modified Dulbecco Medium)即Iscove改良的DMEM培养基,是Guilber 和Iscove在1976年设计的,用以培养红细胞前体细胞和巨噬细胞。青霉素-链霉素混合液通常也被称为“双抗”,是体外培养中为预防微生物污染最常用的抗生素,其中,青霉素能够干扰细菌细胞壁的合成,对革兰阳性菌特别有效;而链霉素能够与细菌核糖体30S亚单位结合,抑制细菌蛋白质的合成,对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均有效,但对革兰氏阴性菌特别有效。青霉素和链霉素联合使用可以预防绝大部分的细菌污染。

本产品含有多类细胞培养所需的氨基酸、维生素、无机盐等多种成分,但不含蛋白质、脂类或任何生长因子,故此产品需搭配血清或无血清添加物使用。

注意事项[1]

1、培养基长期放置,需要2-8℃避光保存,请勿低温冻存。

2、培养基中添加的L-谷氨酰胺在溶液中不稳定、易分解,长期放置后使用若发现细胞生长变慢可在使用前加入适量的L-谷氨酰胺,来维持细胞的正常代谢。

3、含有NaHCO3的培养基开瓶次数较多后,培养基内的CO2会逐渐溢出,PH值上升,培养基的颜色会偏紫色。培养基偏碱性会造成细胞生长停滞或死亡,建议分装成小瓶使用或用HEPES调至正常PH范围。

4. 本产品仅供科研使用,不适用于临床。

IMDM(含双抗)使用步骤[1]

(一)准确称量试剂:根据不同的菌类和用途,选择适宜的培养基,培养基所需试剂必须纯净。

(二)校正pH值:将称量好的培养基各种成分放入容器内,标记划线,加热溶解,补充水分,测定酸碱度,常用pH6.8~8.0的精密试纸或酸度计测定。用1N NaOH和1N HCl调节pH值到适宜范围内。

(三)过滤:将玻璃漏斗置铁架上,再用IMDM(含双抗)纱布夹棉花或用滤纸放在漏斗中,将上述培养基倒入其中过滤至透明。

(四)分装:将过滤后的培养基分装于中试管或三角瓶内(试管内每支装5mL;三角瓶中装100~150ml),塞好棉塞用牛皮纸包扎好,准备灭菌。

(五)灭菌:培养基的灭菌,常用高压蒸汽灭菌法。一般微生物的营养细胞在水中煮沸后即被杀死,但细菌的芽胞有较强的抗热性,须经高压蒸汽灭菌才能达到彻底灭菌的目的。根据蒸汽温度随压力升高而上升的原理,即压力越大,蒸汽温度就越高。因此,在同一温度条件下,采用高压蒸汽灭菌比干热灭菌法效果要好。而且在湿热情况下,菌体吸收水分后,其蛋白质易于凝固变性,因为蒸汽的穿透力强,杀菌效果好。

参考文献

[1] IMDM(含双抗)使用说明

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武汉普诺赛生命科技有限公司

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