小鼠UDP-N-乙酰基葡萄糖胺(UDP-GLCNAC)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

小鼠UDP-N-乙酰基葡萄糖胺(UDP-GLCNAC)ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠UDP-N-乙酰基葡萄糖胺(UDP-GLCNAC)(ADAM8)水平。用纯化的小鼠UDP-N-乙酰基葡萄糖胺(UDP-GLCNAC)(ADAM8)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入小鼠UDP-N-乙酰基葡萄糖胺(UDP-GLCNAC)，再与HRP标记的小鼠UDP-N-乙酰基葡萄糖胺(UDP-GLCNAC)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠UDP-N-乙酰基葡萄糖胺(UDP-GLCNAC)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠UDP-N-乙酰基葡萄糖胺(UDP-GLCNAC)(ADAM8)浓度。

快速增殖的细胞，包括大多数的癌细胞在内，优先选择糖酵解产生乳酸的途径，而不是线粒体氧化磷酸化途径来获得ATP能量，这种现象被称为Warburg效应。Warburg效应促进癌细胞增殖的作用主要体现在三个方面：1）糖酵解能快速地为细胞提供ATP；2）糖酵解的中间代谢物能作为其它生物大分子合成的前体；3）糖酵解能减少细胞的氧化自由基浓度，维持氧化还原平衡。然而癌细胞是如何通过调控葡萄糖代谢途径来促进其恶性增殖行为的分子机制目前还并不清楚。

在糖酵解途径中，约2-5%的葡萄糖会经由支路已糖胺途径（HBP）生成UDP-乙酰氨基葡糖胺（UDP-GlcNAc），用于在蛋白质的丝氨酸或苏氨酸残基上进行糖基化修饰（O-GlcNAc）。该糖基化修饰广泛存在于细胞质、线粒体、以及细胞核内的蛋白上，是一种动态可逆的蛋白修饰。

应用^[4][5]

用于宿主细胞对乙肝病毒复制的代谢应答研究

以含有HBV基因组的稳定肝肿瘤细胞系为研究对象,以期建立和完善基于核磁共振(NMR)的细胞代谢组分析方法及具有统计意义的多变量代谢组学数据分析方法；

采用代谢组学、蛋白质组学以及分子生物学相结合的方法,研究HBV复制影响细胞代谢组的变化规律,发现与HBV复制相关的代谢物以及所受影响的代谢途径；阐明HBV复制导致的宿主细胞脂肪酸组成变化；深入探讨HBV复制与宿主细胞代谢改变之间的关系。

建立了基于NMR的细胞代谢组分析所用样品的制备方法；提出了细胞提取物样品数据的细胞重量归一化方法,并给出了具体的操作流程；完善了培养基提取物数据的细胞生长曲线下面积归一化方法。

代谢组学分析表明HBV复制导致宿主细胞的代谢组发生了明显的变化,主要表现为中心碳代谢相关代谢物的含量明显上升；核苷酸合成途径中间产物的含量显著性上升,核苷酸降解途径中间产物的含量明显下降；胆碱含量明显降低,磷酸胆碱含量则显著性升高；己糖胺生物合成途径的末端产物UDP-N-乙酰基葡萄糖胺(UDP-GlcNAc)和UDP-N-乙酰基半乳糖胺(UDP-GalNAc)的含量明显升高；与氧化应激相关的还原型谷胱甘肽含量显著性降低,同时伴随着α-酮酸含量的升高。

GC-MS分析表明,HBV复制导致宿主细胞的脂肪酸组成发生了显著性改变。蛋白质组数据与文献报道结果进一步验证了代谢组数据分析所得结果。整合分析表明HBV可以通过调节相关酶的表达来调控宿主细胞的代谢,主要表现为宿主细胞的糖酵解、三羧酸循环和磷酸戊糖途径代谢增强；宿主细胞的核苷酸合成代谢增强；HBV感染导致宿主细胞脂肪酸组成发生改变,必需脂肪酸含量显著性降低,总脂肪酸含量以及其它脂肪酸含量则明显升高。这些代谢变化可以为HBV的复制和表达提供物质基础和能量来源。

参考文献

[1]O-GlcNAc Signaling Entrains the Circadian Clock by Inhibiting BMAL1/CLOCK Ubiquitination[J].Min-Dian Li,Hai-Bin Ruan,Michael E.Hughes,Jeong-Sang Lee,Jay P.Singh,Steven P.Jones,Michael N.Nitabach,Xiaoyong Yang.Cell Metabolism.2013(2)

[2]Correlation between plasma amino acid profiles and the various stages of hepatitis B infection[J].J.Yang,J.He,H.Cao,X.Zhao,S.Fu,H.Lu,Y.Chen,X.Pan,L.Li.European Journal of Clinical Microbiology&Infectious Diseases.2012(8)

[3]Serum fatty acid synthase concentration is increased in patients with hepatitis viral infection and may assist in the prediction of liver steatosis[J].Jorge Joven,Eugenia Espinel,Anna Rull,Raúl Beltrán-Debón,Gerard Aragonès,Esther Rodríguez-Gallego,Jordi Camps,Juan Pedro-Botet,Teresa Sans,Javier A.Menéndez,Carlos Alonso-Villaverde.Journal of Clinical Virology.2011(3)

[4]Oxygenated derivatives of cholesterol promote hepatitis B virus gene expression through nuclear receptor LXRαactivation[J].Hye Young Kim,Hyun Kook Cho,Hyeong Hoe Kim,JaeHun Cheong.Virus Research.2011(1)

[5]李洪德.宿主细胞对乙肝病毒复制的代谢应答研究[D].中国科学院研究生院（武汉物理与数学研究所）,2014.