ADSC-GM SQ Kit的应用

背景^[1-3]

ADSC-GM SQ Kit是脂肪组织来源干细胞的专用培养基，用于脂肪组织来源干细胞的诱导和传代培养。脂肪来源的间充质干细胞(或称基质细胞),简称为ADSC,主要存在于脂肪组织基质血管成分(SVF)中。间充质干细胞最早发现于骨髓,现已被证实存在于机体的多种组织器官中,是一群具有多向分化潜能的多能干细胞。

脂肪组织来源的干细胞(ADSCs)是由间充质细胞发育而来。ADSCs在医学和生物医学领域有许多应用，包括糖尿病的治疗和组织再生。

脂肪细胞(脂肪组织)通过一系列信号和转录级联从间充质细胞发育。脂肪细胞的分化非常复杂，涉及细胞形态、激素敏感性和基因表达的变化。

ADSCs是来源于脂肪细胞的干细胞，可以分化成多种不同的细胞类型，但与胚胎干细胞(ESCs)和诱导多能干细胞(iPSCs)相比更受限制。

ADSCs可以从脂肪细胞中分离出来，首先用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤样品，然后将样品置于含有胶原酶和PBS的无菌培养板上。反复吸移样品，然后离心，得到含有ADSCs和SVF的溶液。在加入各种其他化学物质后再次离心，然后通过70μm的细胞过滤器过滤。

ADSCs用于再生医学治疗，因为它们可以分化成各种不同的细胞谱系。这些干细胞还具有抗凋亡、抗炎、促血管生成、免疫调节和抗瘢痕作用，这使得它们非常有效。

由于ADSCs来源于间充质细胞，它们主要用于组织再生，特别是在医学的成骨、成脂、成软骨和心血管领域。

应用^[4][5]

用于脂肪来源干细胞对肥胖相关炎症及胰岛素抵抗的作用及机制研究

通过建立肥胖模型,并对模型小鼠进行ADSC干预治疗,证实了ADSC能够缓解肥胖诱发的慢性炎症以及胰岛素抵抗；并且通过体内外实验证明了ADSC通过促进巨噬细胞向抑炎M2型转化而抑制脂肪组织炎症。这为ADSC作为免疫调节细胞在临床上治疗肥胖和相关代谢疾病提供了新的思路。

方法：1.饮食诱导肥胖小鼠模型的建立8周龄C57BL/6雄性小鼠分别给予高脂饮食喂养或常规对照饮食喂养。造模喂养共进行15周,期间每周进行小鼠体重的监测,绘制成曲线。

2.脂肪来源间充质干细胞(ADSC)的分离、扩增及鉴定剥离C57BL/6雄性小鼠附睾处脂肪组织,剪碎后加入含有Ⅰ型胶原酶的KRB缓冲液,37℃摇床中消化50分钟。离心得到细胞沉淀,洗涤后过100μm铜网。滤过后的混悬液2000rpm,5min离心后弃上清。细胞沉淀即为含有ADSC的脂肪组织基质细胞(SVF),可经传代培养进行纯化。用含有bFGF的DMEM培养基重悬SVF,37℃、5%CO2培养,隔天换液一次。当细胞汇合度达到80%时(约6天左右),可进行传代。第三代至五代的细胞进行后续实验。通过流式细胞术的方式,检测第三代ADSC表面CD105、CD90、CD44以及CD11b、CD34、MHC-Ⅱ分子的表达情况。

3.ADSC体内示踪及体内干预 ADSC的体内示踪第三代的ADSC在对数生长期时,在培养基中加入EdU培养24h。通过对细胞进行Apollo567及Hoechst染色检测细胞标记效率。将标记效率高于90%的ADSC配制成1×106/ml的细胞悬液,注射于高脂喂养8周后的C57BL/6雄性小鼠。分别于注射后3天和7天后处死小鼠,取附睾处脂肪组织进行EdU染色。荧光显微镜下观察ADSC定位的情况。

ADSC的体内干预小鼠高脂8周之后,开始进行ADSC干预治疗。以7天为一个周期,分别进行生理盐水和ADSC细胞悬液的注射。注射方式采取腹腔注射途径,注射量为体积为0.5ml的生理盐水或含有1×106ADSC的细胞混悬液0.5ml。整个干预时长6周。

参考文献

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[2]IL-6 Strikes a Balance in Metabolic Inflammation[J].Anthony J.Covarrubias,Tiffany Horng.Cell Metabolism.2014(6)

[3]Growth Factor and Th2 Cytokine Signaling Pathways Converge at STAT6 to Promote Arginase Expression in Progressive Experimental Visceral Leishmaniasis[J].E.Yaneth Osorio,Bruno L.Travi,Alda M.da Cruz,Omar A.Saldarriaga,Audrie A.Medina,Peter C.Melby.PLOS Pathogens.2014(6)

[4]Concise Review:Two negative feedback loops place mesenchymal stem/stromal cells at the center of early regulators of inflammation<link href="#stem1400-note-0001"/>[J].Darwin J.Prockop.STEM CELLS.2013(10)

[5]尚倩雯.脂肪来源干细胞对肥胖相关炎症及胰岛素抵抗的作用及机制研究[D].山东大学,2015.