BAX(小鼠来源抗体)的应用

背景^[1-3]

BAX(小鼠来源抗体)以人工合成的Bax氨基端(Amino-terminal)的一段多肽为抗原制备而成的抗Bax小鼠单克隆抗体。克隆号为6A7(Clone6A7)，是应用最广的Bax抗体。抗体类型为Mouse IgG1。

本Bax抗体可以检测内源性水平的Bax，未发现和其它Bcl-2家族蛋白有交叉反应。Bax是一种促凋亡蛋白，上调Bax蛋白水平可以促进细胞凋亡。在通过线粒体应激诱导的细胞凋亡中Bax起关键作用。

bax基因是人体最主要的凋亡基因，属于bcl-2基因家族，编码的Bax蛋白可与Bcl-2形成异二聚体，对Bcl-2产生阻抑作用。研究发现Bax/Bcl-2两蛋白之间的比例关系是决定对细胞凋亡(Apoptosis)抑制作用强弱的关键因素，因此认为，bax是极重要的促细胞凋亡(Apoptosis)基因之一。

Bax可以形成寡聚体，然后从细胞浆中转移到线粒体膜上；通过和线粒体膜上的一些pore proteins相互作用，增强线粒体的通透性(permeability)；最后导致细胞色素c释放(cytochrome c release)、caspase-9激活以及后续的其它caspase激活和最终的细胞凋亡。Bax可以和Bcl-2形成多聚体，来调节线粒体膜的通透性，最终调节细胞的凋亡或存活。

试验中适用组织为石蜡切片，其阳性部位为细胞浆，阳性对照为乳腺癌，组织处理为热修复。BAX是与BCL-2同源的水溶性相关蛋白，是BCL-2基因家族中细胞凋亡促进基因，BAX的过度表达可拮抗BCL-2的保护效应而使细胞趋于死亡。目前多和BCL-2一起用于肿瘤的研究。

应用^[4][5]

用于胰岛素受体底物1通过PI3K/Akt通路下调大鼠成骨细胞NFκB和BAX表达促进成骨细胞增殖研究

Bcl2（B-cell lymphoma2,Bcl2）家族长久以来被认为是凋亡主要调节机制，其中Bcl2抑制凋亡，BAX促进凋亡，二者独立调节凋亡。研究发现糖尿病大鼠凋亡显著增加。糖尿病时，高糖环境引起细胞损伤，BAX激活和引起其他促凋亡蛋白如细胞色素C释放。1型糖尿病小鼠骨中成骨细胞凋亡增加。一些研究表明IRS1具有抗凋亡能力，IRS1可通过调节Bcl2调控凋亡。研究组前期试验显示2型糖尿病合并骨质疏松症的发病可能与骨组织IGF1、IRS1、IRS2表达受抑制有关，同时可能与骨组织PI3K、Akt表达降低、NFκB表达升高有关。

方法：1提取Wister大鼠肝脏RNA，逆转录生成cDNA。根据NCBI提供的IRS1基因编码序列，委托DNA合成公司合成带适当酶切位点的引物，以cDNA作为模板合成IRS1，插入pEGFP-N1质粒，获得过表达IRS1的表达载体。体外转染人Hela细胞。

2酶消化联合组织块法体外培养Wister大鼠成骨细胞，倒置显微镜下观察成骨细胞形态，传代至第二代时茜素红染色鉴定成骨细胞。传代至第二代时pEGFP-N1-IRS1表达载体脂质体法LipofectamineTM2000瞬时转染成骨细胞，同时应用PI3K激酶特异性抑制剂LY294002阻断PI3K/Akt通路，免疫荧光和Western blotting法观察成骨细胞NFκB表达变化。

3酶消化联合组织块法体外培养Wister大鼠成骨细胞，传代至第二代时pEGFP-N1-IRS1脂质体法LipofectamineTM2000瞬时转染成骨细胞，同时应用LY294002阻断PI3K/Akt通路，观察成骨细胞IRS1/PI3K/Akt通路及BAX的表达变化。同时检测成骨细胞细胞周期。

参考文献

[1]Loss of Cbl–PI3K Interaction Enhances Osteoclast Survival due to p21‐Ras Mediated PI3K Activation Independent of Cbl‐b[J].Naga Suresh Adapala,Mary F.Barbe,Alexander Y.Tsygankov,Joseph A.Lorenzo,Archana Sanjay.J.Cell.Biochem..2014(7)

[2]Possible roles of insulin signaling in osteoblasts[J].Sakarat N.Pramojanee,Mattabhorn Phimphilai,Nipon Chattipakorn,Siriporn C.Chattipakorn.Endocrine Research.2014(4)

[3]Saxagliptin affects long-bone microarchitecture and decreases the osteogenic potential of bone marrow stromal cells[J].María Laura Sbaraglini,María Silvina Molinuevo,Claudia Sedlinsky,León Schurman,Antonio Desmond McCarthy.European Journal of Pharmacology.2014

[4]MicroRNA-145 suppresses hepatocellular carcinoma by targeting IRS1 and its downstream Akt signaling[J].Yelin Wang,Chen Hu,Jun Cheng,Binquan Chen,Qinghong Ke,Zhen Lv,Jian Wu,Yanfeng Zhou.Biochemical and Biophysical Research Communications.2014(4)

[5]马欢.胰岛素受体底物1通过PI3K/Akt通路下调大鼠成骨细胞NFκB和BAX表达促进成骨细胞增殖[D].河北医科大学,2014.