辣根过氧化物酶标记兔抗猴IGG的应用

背景^[1-3]

辣根过氧化物酶标记兔抗猴IGG是以猴IGG为抗原以兔为免疫宿主的辣根过氧化物酶标记免疫蛋白，可以特异性结合猴IGG，主要用于检测猴IGG的Western blotting、Immunohistocry、ELISA、IF、IHC-P、IHC-F等生物实验。

IgG抗体(immunoglobulin G)在免疫应答中起着激活补体，中和多种毒素的作用。IgG抗体持续时间长，是唯一能在母亲妊娠期穿过胎盘保护胎儿的抗体。它们还从乳腺分泌进入初乳，使新生儿时间得到抗体保护。IgG是四链单体，占血清Ig总量的75%，是血清和细胞外液中最主要的抗体成分，可将人IgG分为四个亚类，依其在血清中浓度高低，分别为IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。

IgG1、IgG3、IgG4可穿过胎盘屏障，在新生儿抗感染免疫中起重要作用；IgG1、IgG2、IgG4可通过其Fc段与葡萄球菌蛋白A（SPA）结合，借此可纯化抗体，或用于免疫诊断；IgG1、IgG3可高效激活补体，并可与巨噬细胞、NK细胞表面Fc受体结合，发挥调理作用、ADCC作用等；某些自身抗体和引起二、三型超敏反应的抗体也属于IgG。

过氧化物酶，通常来源于辣根（因此称辣根过氧化物酶），是临床检验试剂中的常用酶。该产品不但广泛用于多个生化检测项目，也广泛运用于免疫类（ELISA）试剂盒。过氧化物酶作为多个试剂盒显色体系的关键成分，对试剂盒的质量有重要影响。

应用^[4][5]

用于新型埃博拉疫苗诱导灵长类治疗性抗体研究

利用团队成熟的病毒载体疫苗平台,在已构建完Zaire型、Sudan型埃博拉病毒及马尔堡病毒腺病毒载体疫苗基础上,继续开发2型腺病毒载体本迪布焦埃博拉病毒疫苗rAd2-BEBOV GP,结果显示,经密码子优化后的本迪布焦埃博拉病毒GP蛋白编码序列成功重组至病毒载体,并能在细胞水平高效率表达全长GP蛋白。

接下来,本研究利用酶联免疫法(ELISA)和假病毒微量中和实验对比研究腺病毒载体疫苗、GP蛋白和埃博拉病毒样颗粒(eVLP)三种埃博拉候选疫苗诱导抗体反应的能力,结果显示,无论是单次免疫还是两次免疫,在小鼠和中国猕猴中腺病毒载体疫苗均可迅速诱导高水平的结合抗体和中和抗体。本研究通过优化配伍多种亚型腺病毒载体疫苗,并联合GP蛋白疫苗和eVLP疫苗反复免疫中国猕猴,获得可有效中和多种亚型丝状病毒假病毒感染的高免血清。

进一步利用AKTA蛋白纯化系统,优化纯化体系达到较高的IgG回收率,获得一批高纯度灵长类免疫球蛋白IgG,并保留了较高的中和活性。由于中国猕猴抗体基因与人高度同源,使用中国猕猴作为免疫动物制备烈性传染病免疫球蛋白不但可降低异源蛋白的毒副作用,更重要的是,本研究利用多种疫苗反复免疫灵长类动物获得的广谱抗丝状病毒免疫球蛋白IgG是应对不同亚型感染的良策,为防控埃博拉疫情提供了应对方案。

参考文献

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[2]Specific neutralizing response in plasma from convalescent patients of Ebola Virus Disease against the West Africa Makona variant of Ebola virus[J].Joanna Luczkowiak,JoséR.Arribas,Sara Gómez,Víctor VJiménez-Yuste,Fernando de la Calle,Aurora Viejo,Rafael Delgado.Virus Research.2015

[3]The multifunctional Ebola virus VP40 matrix protein is a promising therapeutic target[J].Madara,Jonathan J,Han,Ziying,Ruthel,Gordon,Freedman,Bruce D,Harty,Ronald N.Future Virology.2015(5)

[4]Therapeutics for postexposure treatment of Ebola virus infection[J].Jerebtsova,Marina,Nekhai,Sergei.Future Virology.2015(3)

[5]胡培宇.新型埃博拉疫苗诱导灵长类治疗性抗体研究[D].广州医科大学,2017.