半胱胺酸蛋白酶蛋白-7抗体的应用

背景^[1-3]

半胱胺酸蛋白酶蛋白-7抗体可以特异性结合半胱胺酸蛋白酶蛋白-7主要用于Western blotting、Immunohistocry、ELISA、IF、IHC-P、IHC-F等生物实验。

半胱胺酸蛋白酶蛋白-7被鉴定为凋亡的主要执行者。半胱胺酸蛋白酶蛋白-7和半胱胺酸蛋白酶蛋白-3一样，是一种半胱天冬酶效应子，负责裂解下游底物，如（ADP-核糖）聚合酶和PARP。在细胞凋亡期间，半胱胺酸蛋白酶蛋白-7在ASP23、Asp198和Asp206位点通过蛋白水解过程由上游半胱天冬酶激活，从而产生成熟的亚基。与半胱胺酸蛋白酶蛋白-2和-3相似，半胱胺酸蛋白酶蛋白-7在识别序列DEVD后，优先裂解底物。

半胱氨酸蛋白酶（Caspases）是半胱氨酸蛋白酶家族，是程序性细胞死亡或凋亡的关键介质，是活细胞通往死亡之路的引导者。所有半胱氨酸蛋白酶的前体形式由前结构域和大小催化亚基组成。半胱氨酸蛋白酶的活化由几种刺激产生，包括配体-受体相互作用、生长因子剥夺和细胞功能抑制剂。

所有已知的半胱氨酸蛋白酶都需要在天冬氨酸附近裂解以释放一个大亚基和一个小亚基，这些亚单位结合成a2b2四聚体以形成活性酶。半胱天冬酶-3（Caspase-3）基因也称为Yama、CPP32和凋亡蛋白，编码32 kDa蛋白。Caspase-3最主要的底物是多聚（ADP-核糖）聚合酶PARP（poly(ADP-ribose)polymerase），该酶与DNA修复、基因完整性监护有关。在细胞凋亡启动时，Caspase-3被Asp-28/Ser-29（在N末端前结构域之间）和Asp-175/Ser-176（在大亚基和小亚基之间）的切割激活，产生17kDa的大亚基和12kDa的小亚基。p17和p12二聚化形成活化形式的cleaved caspase-3。

应用^[4][5]

用于Caspase3和Caspase7在胚胎停育绒毛组织中的表达研究

通过对胚胎早期停育患者(胚胎停育组)和正常早期妊娠妇女(正常妊娠组)的绒毛组织中细胞凋亡情况进行检测,同时以标记分子Caspase3、标记分子Caspase7对胚胎早期停育患者(胚胎停育组)和正常早期妊娠妇女(正常妊娠组)的绒毛组织中细胞凋亡情况进行检测,探讨Caspase3和Caspase7蛋白在停育胚胎绒毛组织中的表达意义。

方法:选取确诊为早期胚胎停育行人工流产术的胚胎绒毛组织21例,作为胚胎停育组;同时期正常早期妊娠要求行人工流产术终止妊娠的胚胎绒毛组织21例,作为正常妊娠组。

运用HE染色法结合光学显微镜对两组绒毛组织进行镜下观察;TUNEL法对两组绒毛组织进行凋亡实验;免疫组织化学-SP法对caspase3和caspase7的表达进行定位;蛋白质免疫印迹法(Western blot)对两组绒毛组织的caspase3、caspase7的表达做定量分析。

结果:1.两组妊娠妇女的年龄、月经周期、妊娠天数、孕次未发现统计学差异(P>0.05)。

2. HE染色:正常妊娠组的绒毛组织镜下结构清晰,易于辨认,细胞排列整齐。胚胎停育组绒毛组织镜下结构较清晰,细胞排列稍紊乱。

3. TUNEL法:凋亡细胞分布于绒毛滋养层细胞间和/或间质内。正常妊娠组的绒毛内着色较少,分布于绒毛滋养层细胞间;胚胎停育组绒毛内成片着色,颜色较深,明显多于正常妊娠组,分布于绒毛滋养层细胞间和间质内。

4. 免疫组织化学-SP法:两组标本Caspase3蛋白的表达:(正常妊娠组:0.29±0.05,胚胎停育组:0.59±0.07,P<0.05),Caspase7蛋白的表达也有统计学差异(正常妊娠组:0.22±0.04,胚胎停育组:0.32±0.08,P<0.05)。

5. 5.Western blot:胚胎停育组绒毛组织中Caspase3蛋白(0.033±0.003)及Caspase7蛋白(0.023±0.004)的表达明显高于正常妊娠组Caspase3蛋白(0.023±0.002)及Caspase7蛋白(0.014±0.002)的表达,差异有统计学区别(P<0.05)。

参考文献

[1]Obesity and recurrent miscarriage:A systematic review and meta‐analysis[J].Marcelo B.Cavalcante,Manoel Sarno,Alberto B.Peixoto,Edward Araujo Júnior,Ricardo Barini.Journal of Obstetrics and Gynaecology Research.2019(1)

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[3]Associations between fetal size,sex and both proliferation and apoptosis at the porcine feto-maternal interface[J].Claire Stenhouse,Charis O.Hogg,Cheryl J.Ashworth.Placenta.2018

[4]Serum chemerin level in women with PCOS and its relation with the risk of spontaneous abortion[J].Xuezhou Yang,Xiaozhen Quan,Yanli Lan,Qipeng Wei,Jinhai Ye,Xiaofang Yin,Zhisong Ji,Hui Xing,Ying Yang.Gynecological Endocrinology.2018(10)

[5]申雷娜.Caspase3和Caspase7在胚胎停育绒毛组织中的表达研究[D].皖南医学院,2019.