辣根过氧化物酶标记羊抗大鼠IGG的应用

背景^[1-3]

辣根过氧化物酶标记羊抗大鼠IGG是以大鼠IGG为抗原以羊为宿主制得的羊抗大鼠IGG抗体，可以特异性结合大鼠IGG。过氧化物酶，通常来源于辣根（因此称辣根过氧化物酶），是临床检验试剂中的常用酶。该酶不但广泛用于多个生化检测项目，也广泛运用于免疫类（ELISA）试剂盒。过氧化物酶作为多个试剂盒显色体系的关键成分，对试剂盒的质量有重要影响。

免疫球蛋白G(IgG)是在脾脏和淋巴结中合成，在人体血清中的含量最高(占Ig量的75%)，而且在血清中半衰期长，主要分布在血清和组织液中，是抗细菌、抗毒素和抗病毒抗体的主要组成部分，也是机体抗感染免疫的过程中的重要物质基础。由于IgG的含量最高，是人体免疫反应的最重要的物质基础，而且它也是唯一能通过胎盘屏障的免疫球蛋白，对哺乳动物新生幼仔，新生儿抗感染起重要作用。

IgG抗体(immunoglobulin G)在免疫应答中起着激活补体，中和多种毒素的作用。IgG抗体持续时间长，是唯一能在母亲妊娠期穿过胎盘保护胎儿的抗体。它们还从乳腺分泌进入初乳，使新生儿时间得到抗体保护。

IgG是四链单体，占血清Ig总量的75%，是血清和细胞外液中最主要的抗体成分，可将人IgG分为四个亚类，依其在血清中浓度高低，分别为IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。IgG主要由脾脏和淋巴结中的浆细胞产生，血清半衰期较长，约20~23天，是再次体液免疫应答产生的主要抗体，其亲和力高，在体内广泛分布，具有重要的免疫效应，是机体抗感染的主力军。

应用^[4][5]

用于生物素化AcMNPV基于VSV-G跨膜结构域表面展示PEDV S1及其免疫大鼠活性研究

通过构建生物素化重组杆状病毒来展示PEDV的主要抗原特征性蛋白S1。在杆状病毒表面高丰度展示S1的同时,利用生物素-链霉亲和素系统的高亲和力结合的特点,可简单高效地纯化杆状病毒。进而,以该病毒作为疫苗免疫怀孕大鼠,通过检测大鼠产生的S1特异性IgG和乳汁sIgA评价其免疫活性。

分别克隆了经修饰的PEDV S1基因、生物素连接酶基因(BrA)以及融合生物素受体肽序列(BAP)的杆状病毒基因gp64,利用Bac-to-Bac系统和线性化同源重组以及非同源末端连接构建重组杆状病毒。经Western blot、直接荧光、间接免疫荧光、免疫电镜分析S1蛋白在细胞中或病毒表面的表达和定位。利用链霉亲和素磁珠纯化生物素化重组杆状病毒,通过Western blot、银染以及荧光定量PCR分析重组病毒的纯化效果。

分别用磁珠法纯化的重组杆状病毒以及野生型PEDV和杆状病毒Ac-WT、生理盐水(Saline)作为免疫原皮下免疫怀孕SD大鼠,通过ELISA方法检测孕鼠血清中S1特异性IgG,乳汁S1特异性sIgA以及大鼠乳汁总sIgA的含量分析重组杆状病毒的免疫原性。

参考文献

[1]The S2 glycoprotein subunit of porcine epidemic diarrhea virus contains immunodominant neutralizing epitopes[J].Faten A.Okda,Steven Lawson,Aaron Singrey,Julie Nelson,Kyle S.Hain,Lok R.Joshi,Jane Christopher-Hennings,Eric A.Nelson,Diego G.Diel.Virology.2017

[2]Porcine epidemic diarrhea virus infection:Etiology,epidemiology,pathogenesis and immunoprophylaxis[J].Kwonil Jung,Linda J.Saif.The Veterinary Journal.2015(2)

[3]Porcine epidemic diarrhoea virus:a comprehensive review of molecular epidemiology,diagnosis,and vaccines[J].Daesub Song,Bongkyun Park.Virus Genes.2012(2)

[4]Molecular characterization and phylogenetic analysis of porcine epidemic diarrhea virus(PEDV)field strains in south China[J].Zhi-Li Li,Ling Zhu,Jing-Yun Ma,Qing-Feng Zhou,Yan-Hua Song,Bao-Li Sun,Rui-Ai Chen,Qing-Mei Xie,Ying-Zuo Bee.Virus Genes.2012(1)

[5]刘轶轩.生物素化AcMNPV基于VSV-G跨膜结构域表面展示PEDV S1及其免疫大鼠活性研究[D].浙江理工大学,2019.