山羊抗小鼠IgG(H&L)HRP标记抗体的应用

背景^[1-3]

山羊抗小鼠IgG(H&L)HRP标记抗体是以小鼠IgG(H&L)为抗原的HRP山羊多克隆抗体，可以特异性结合小鼠IgG(H&L)。山羊抗小鼠IgG(H&L)(HRP)主要用于ICC/IF,Dotblot,ELISA,IHC-P,IHC-Fr,Immunomicroscopy,WB等小鼠IgG(H&L)检测实验。

抗原与抗体能够特异性结合是基于抗原决定簇（表位）和抗体超变区分子间的结构互补性与亲和性。这种特性是由抗原、抗体分子空间构型所决定的。除两者分子构型高度互补外，抗原表位和抗体超变区必须密切接触，才有足够的结合力。

辣根过氧化物酶（HRP）是一种糖蛋白，每个分子含有一个氯化血红素(protonhemin)区作辅基。该产品不但广泛用于多个生化检测项目，也广泛运用于免疫类（ELISA）试剂盒。过氧化物酶作为多个试剂盒显色体系的关键成分，对试剂盒的质量有重要影响。

免疫球蛋白G（免疫球蛋白G）主要由脾、淋巴结中的浆细胞合成和分泌，以单体形式存在。

根据免疫球蛋白G分子中γ链抗原性差异，人免疫球蛋白G有4个亚类：免疫球蛋白G 1、免疫球蛋白G 2、免疫球蛋白G 3和免疫球蛋白G 4（小鼠4个亚类是免疫球蛋白G 1、免疫球蛋白G 2a、免疫球蛋白G 2b和免疫球蛋白G 3）。其中免疫球蛋白G 3γ3铰链区含有62个氨基酸残基，具有4个重复γ1铰链区（15个氨基酸残基）的串连结构，重链间二硫键数量多，约10～15个，因此易被蛋白酶裂解，半衰期也较短。

应用^[4][5]

用于禽流感病毒H5N1 HA1与小鼠IgG Fc片段融合蛋白的表达研究

禽流感病毒(Avian Infulenza Virus,AIV)主要通过呼吸道感染机体,本研究用禽流感病毒H5N1的主要保护性抗原血凝素HA1作为模式抗原,通过一个连接(Linker)片段(氨基酸序列：GSGGGGSGGGGSGS)与小鼠IgG2a Fc片段融合(HA1-Linker-wFc,简写为HA1-wFc),利用Bac-to-Bac表达系统表达HA1和IgG2aFc野生型片段的融合蛋白(HA1-wFc)及HA1和IgG2a Fc突变型片段的融合蛋白(HA1-mFc)。

为今后进一步开展以FcRn介导的IgG胞转通路转运抗原的黏膜屏障的研究奠定良好的基础。本研究取得的主要结果如下：1.HA1-wFc基因的克隆根据GenBank上公布的禽流感病毒H5N1 HA1基因(AY830774.1)和小鼠IgG2a Fc基因(V00798.1)序列设计引物,利用实验室保存的质粒pMD18-T-HA1和pMD18-T-wFc为模板,分别扩增了禽流感病毒H5N1 HA1基因和小鼠IgG2a wFc片段基因,其中wFc片段C1q结合位点发生突变而丧失与其结合能力。用Linker把HA1与wFc片段相连(HA1-wFc),再与pMD18-T载体相连,对得到的阳性重组质粒pMD18-T-HA1-wFc进行序列测定,HA1基因和wFc基因(突变位点除外)与GenBank公布的相应基因序列同源性均为100%。

2. HA1-mFc基因的克隆以重组质粒pMD18-T-HA1-wFc为模板,采用PCR定点突变方法对wFc与FcRn结合的关键位点进行突变,使其丧失与FcRn的结合能力。将HA1-mFc片段连接到pMD18-T载体,对得到的阳性重组质粒pMD18-T-HA1-mFc进行序列测定,HA1基因和mFc基因(突变位点除外)与GenBank公布的相应基因序列同源性均为100%。

3.32a-HA1-wFc和KG-HA1融合蛋白的原核表达以重组质粒pMD18-T-HA1-wFc为模板,将HA1-wFc片段连接到载体pET-32a上构建重组原核表达质粒(pET-32a-HA1-wFc),并与实验室保存的pGEX-KG-HA1,分别在大肠杆菌中获得了表达,Western blot分析及红细胞凝集试验表明表达的32a-HA1-wFc和KG-HA1融合蛋白均具有良好的免疫学活性。

参考文献

[1]Anti-Inflammatory Actions of Intravenous Immunoglobulin[J].Falk Nimmerjahn,Jeffrey V.Ravetch.Annual Review of Immunology.2008

[2]Avian influenza:A review[J].JENNIFER K.THOMAS,JENNIFER NOPPENBERGER.American Journal of Health-System Pharmacy.2007(2)

[3]Avian Flu to Human Influenza[J].David B.Lewis.Annual Review of Medicine.2006

[4]Human Neonatal Fc Receptor Mediates Transport of IgG into Luminal Secretions for Delivery of Antigens to Mucosal Dendritic Cells[J].Masaru Yoshida,Steven M Claypool,Jessica S Wagner,Emiko Mizoguchi,Atsushi Mizoguchi,Derry C Roopenian,Wayne I Lencer,Richard S Blumberg.Immunity.2004(6)

[5]洪素梅.禽流感病毒H5N1 HA1与小鼠IgG Fc片段融合蛋白的表达研究[D].华中农业大学,2011.