丝裂原活化蛋白激酶P38(抗体)的应用

背景^[1-3]

丝裂原活化蛋白激酶P38(抗体)是一类以丝裂原活化蛋白激酶P38为抗原的多克隆抗体，可以特异性结合丝裂原活化蛋白激酶P38，主要用于检测丝裂原活化蛋白激酶P38的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）是一组能被不同的细胞外刺激，如细胞因子、神经递质、激素、细胞应激及细胞黏附等激活的丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶。由于MAPK是培养细胞在受到生长因子等丝裂原刺激时被激活而被鉴定的，因而得名。

所有的真核细胞都能表达MAPK。MAPK通路的基本组成是一种从酵母到人类都保守的三级激酶模式，包括MAPK激酶激酶（MAP kinase kinase kinase，MKKK）、MAPK激酶（MAP kinase kinase，MKK）和MAPK，这三种激酶能依次激活，共同调节着细胞的生长、分化、对环境的应激适应、炎症反应等多种重要的细胞生理/病理过程。

抗原与抗体能够特异性结合是基于抗原决定簇（表位）和抗体超变区分子间的结构互补性与亲和性。这种特性是由抗原、抗体分子空间构型所决定的。除两者分子构型高度互补外，抗原表位和抗体超变区必须密切接触，才有足够的结合力。

抗原抗体反应可分为两个阶段：阶段为抗原与抗体发生特异性结合的阶段，此阶段反应快，仅需几秒至几分钟，但不出现可见反应；

第二阶段为可见反应阶段，这一阶段抗原抗体复合物在适当温度、pH、电解质和补体影响下，出现沉淀、凝集、细胞溶解、补体结合介导的肉眼可见的反应，此阶段反应慢，往往需要数分钟至数小时。

应用^[4][5]

用于p38丝裂原活化蛋白激酶作用蛋白质的筛选、鉴定与初步研究

认识与p38激酶相作用结合的蛋白质不仅有助于阐明p38激酶信号转导途径中由传导子所组成的蛋白质群，而且有助于揭示可能和p38激酶产生相互作用的新关系。

生物质谱技术和蛋白质组学技术的发展及其与其他生化手段的有效结合，使得对极微量样本进行蛋白质的分离与鉴定变得相对容易得多，这种技术上的进步为研究蛋白质提供了无可比拟的强大手段，对深入研究信号分子成为可能。

在试验设计中将生物质谱技术与蛋白质免疫共沉淀试验有效结合，通过蛋白质免疫共沉淀试验得到与靶标蛋白p38共沉淀下来的蛋白质复合物，经过电泳分离后，由生物质谱鉴定，绘出能够与p38激酶结合的蛋白质谱。

实验证实这种方法简便而有效。经LPS刺激后的内毒素休克组或失血性休克组和对照组组织裂解液，通过纯化的p38重组蛋白亲和柱，能够与p38激酶结合的蛋白质得以共沉淀分离。随后进行一维凝胶电泳(sodium dodecyt SulPhate一polyacrylaJ叮lde gel elec加Phoresis，SDS-P AGE)分离，显色。

再在胰酶胶内酶解基础上，应用生物质谱(matrix.asslsted laser desorptio可ioaization一t五ne of flight.masssPectrometly，MALDI一TOF Ms)鉴定分离出来的蛋白质群。

结果发现休克组肺组织有两条蛋白带发生显著变化，在体外与p38直接结合，经肤质谱图鉴定为c一反应蛋白(c一~tive protein，CRP)和内源性p38;休克动物心脏组织有两种蛋白能够与p38相互作用，经鉴定其中一种为三磷酸腺昔(adenosine城phosPhate，ATP)合成酶Q链。

参考文献

[1]Production of C-reactive protein and risk of coronary events in stable and unstable angina.Haverkate Fj,Thompson SG,Puyke SDM,et al.The Lancet.1997

[2]Production of C-reactive protein and risk of coronary events in stable and unstable angina.Haverkate Fj,Thompson SG,Puyke SDM,et al.The Lancet.1997

[3]protects the cells from assembly of the terminal complement components,and sustains an anti-inflammatory innate immune response:implications for sustemic autoimmunity.cells.The Journal of Experimental Medicine.2000

[4]Tyrosine phosphorylation in plant bending.Kameyama K,Kishi Y,Yoshimura M,et al.Nature.2000

[5]宋革.p38丝裂原活化蛋白激酶作用蛋白质的筛选、鉴定与初步研究[D].军医大学,2004.