神经元核抗原抗体的应用

背景^[1-3]

神经元核抗原抗体是以神经元核为抗原多克隆抗体，可以特异性结合神经元核。神经元核抗原抗体主要用于ICC/IF,Dotblot,ELISA,IHC-P,IHC-Fr,Immunomicroscopy,WB等神经元核检测实验。

抗原与抗体能够特异性结合是基于抗原决定簇（表位）和抗体超变区分子间的结构互补性与亲和性。这种特性是由抗原、抗体分子空间构型所决定的。除两者分子构型高度互补外，抗原表位和抗体超变区必须密切接触，才有足够的结合力。

神经核：在中枢神经系统内，形态和功能相似的神经元胞体及其树突聚集在一起形成的灰质团块，称为神经核。

在中枢神经系统内由功能相同的多个神经细胞体集聚在一起而形成的集团，叫神经核。人体中枢神经系统内有很多神经核，其中最重要的有发出12对脑神经的神经核和基底神经核等。各神经核有特殊的生理功能，如发生病变，则有明显的临床体征。

脑神经核团的神经元胞体集群于脑干和脊髓颈段，因神经元的类型或神经纤维包绕程度的差异而得以与其附近的神经元群相区分。

运动核团：动眼神经核（躯体运动）、滑车神经核、三叉神经运动核、展神经核、面神经运动核、疑核、舌下神经核。

感觉核团：三叉神经中脑核、三叉神经感觉主核。

副交感核：动眼神经副交感核（内脏运动）、上涎核和下涎核、迷走神经背核。

特殊感觉核：前庭神经核、耳蜗神经前、后核、孤束核。

应用^[4][5]

用于核膜BK通道调节神经元核钙依赖性的基因表达及树突分支研究

研究发现,神经元核膜BK通道通过影响细胞核周隙的钙离子释放,调节CaMKIV依赖性的细胞核钙离子信号通路,进而调控神经元活动诱导的CREB转录因子的活化,以及下游靶基因的表达,并且影响了神经元树突分支。

1. 核膜BK通道通过CaMKIV依赖性的细胞核钙离子信号通路调节CREB的磷酸化。前期的研究工作提示核膜BK通道能够调节CREB转录因子的转录活性,并且这一作用可能是通过控制细胞核钙离子浓度来实现的。

2. 于是首先探讨了核膜BK通道是否通过细胞核钙离子信号通路来调控CREB转录活性。CREB的转录活性受到两条钙离子依赖的信号通路的调控,一条是Ca/calmodulin(CAM)-dependent protein kinases通路,特别是定位于细胞核内的CaM kinaseⅣ(CaMKⅣ),另一条是MAP kinase/extracellular signal-regulated kinase(ERK)信号通路。

BK通道的特异性阻断剂paxilline处理分离的神经元细胞核后,用免疫印迹法检测到CREB与CaMKIV磷酸化程度比对照组增强,而ERK的磷酸化没有发生改变。这提示CaMKIV通路可能介导了核膜BK通道对CREB的转录活性的调控作用。

为了排除paxilline可能存在的非特异性作用给实验结果带来假阳性,同时在BK通道基因敲除(Kcnmal-/-)小鼠的神经元细胞核上平行做了以上实验。结果显示,在Kcnmal-/-小鼠的神经元细胞核,paxilline既没有改变CREB的磷酸化程度,也没有改变CaMKIV或者ERK的磷酸化程度。这说明paxilline对分离细胞核的CREB与CaMKIV的磷酸化的调节作用是特异性地通过BK通道来实现的,而不是通过可能存在的其它非特异性靶点。

参考文献

[1]Ca V 1 and Ca V 2 Channels Engage Distinct Modes of Ca 2+Signaling to Control CREB-Dependent Gene Expression[J].Damian G.Wheeler,Rachel D.Groth,Huan Ma,Curtis F.Barrett,Scott F.Owen,Parsa Safa,Richard W.Tsien.Cell.2012(5)

[2]Nuclear Calcium-VEGFD Signaling Controls Maintenance of Dendrite Arborization Necessary for Memory Formation[J].Daniela Mauceri,H.Eckehard Freitag,Ana M.M.Oliveira,C.Peter Bengtson,Hilmar Bading.Neuron.2011(1)

[3]BK channel activation:structural and functional insights[J].Urvi S.Lee,Jianmin Cui.Trends in Neurosciences.2010(9)

[4]Channelβ2–4 subunits fail to substitute forβ1 in sensitizing BK channels to lithocholate[J].Anna N.Bukiya,Thirumalini Vaithianathan,Ligia Toro,Alejandro M.Dopico.Biochemical and Biophysical Research Communications.2009(3)

[5]揭威.核膜BK通道调节神经元核钙依赖性的基因表达及树突分支[D].南方医科大学,2015.