抗人IL-12抗体的应用

背景^[1-3]

抗人IL-12抗体是一类以人IL-12为抗原的多克隆抗体，可以特异性结合人IL-12，主要用于检测IL-12的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

白细胞介素-12是趋化因子家族的一种细胞因子，目前共发现了38个白细胞介素，分别命名为IL-1---IL38.功能复杂，成网络，复杂重叠。

白细胞介素(interleukin,IL)12,由抗原提呈细胞和B细胞产生，是一种异源二聚体形式的前炎症细胞因子，并以这种形式分泌到细胞外。IL-12能诱导IFN-γ产生，在体内免疫应答中（特别是在细菌或寄生虫感染中）它也是IFN-γ产生所必需。

来自活化淋巴细胞，由IL-12A(p35)和IL-12B(p40)亚基组成，二者分别与IL-6Rα链和IL-6同源。是NK细胞激活因子，能促进CD4+Th0细胞分化为Th1细胞，协同亚剂量IL-2，可诱导LAK细胞活性。

细胞来源：IL-12主要由b细胞和巨噬细胞产生；其分子是一种异型二聚体，40kd（p40）和35kd(p35)的2个亚基通过二硫键相连接。IL-12主要作用于t细胞和nk细胞，曾被命名为毒性淋巴细胞成熟因子（CLMF）和NK细胞刺激因子（NKSF）。

抗原与抗体能够特异性结合是基于抗原决定簇（表位）和抗体超变区分子间的结构互补性与亲和性。这种特性是由抗原、抗体分子空间构型所决定的。除两者分子构型高度互补外，抗原表位和抗体超变区必须密切接触，才有足够的结合力。

抗原抗体反应可分为两个阶段：阶段为抗原与抗体发生特异性结合的阶段，此阶段反应快，仅需几秒至几分钟，但不出现可见反应；

第二阶段为可见反应阶段，这一阶段抗原抗体复合物在适当温度、pH、电解质和补体影响下，出现沉淀、凝集、细胞溶解、补体结合介导的肉眼可见的反应，此阶段反应慢，往往需要数分钟至数小时。在血清学反应中，以上两阶段往往不能严格分开，往往受反应条件（如温度、pH、电解质、抗原抗体比例等）的影响。

应用^[4][5]

用于猪圆环病毒2型对猪肺泡巨噬细胞IL-10/IL-12p40表达的影响及调控机制研究

通过感染性克隆的方法从自然感染的PMWS仔猪体内分离获得PCV2毒株,而后将其感染猪肺泡巨噬细胞,研究PCV2感染猪肺泡巨噬细胞后调控白介素-10(interleukin-10,IL-10)和白介素-12p40(interleukin-12p40,IL-12p40)表达的动力学特征和调控机制,初步探讨了PCV2相互作用分子在这一过程中的作用与调控机制。

结果。1.从自然感染PCV2的PMWS猪组织DNA中PCR获得2株PCV2病毒(SXXY和SXBJ)的全基因组,基因型鉴定分别为PCV2a和PCV2b基因型;PCV2全基因组体外环化后转染PK-15细胞,连续传代5次后获得了具有感染性的2株PCV2毒株。

2.PCV2 ORF1、ORF2和ORF3编码基因克隆入原核表达载体pET-32a,转化大肠杆菌BL21并以IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测显示正确表达了大小约为52 KDa、39KDa和29 KDa的PCV2 Rep、Cap和ORF3蛋白;回收表达的蛋白,分别免疫新西兰大白兔,分离抗血清,纯化抗PCV2 Rep、Cap和ORF3蛋白的多克隆抗体,western blotting检测显示制备的PCV2 Rep、Cap和ORF3蛋白多克隆抗体特异性良好,效价均高于1:10000。

3.PCV2 ORF1、ORF2和ORF3编码基因克隆入腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV,Pme I单酶切线性化后电转化含有pAdeasy-1的BJ5183感受态细胞,筛选重组腺病毒质粒,Pac I单酶切线性化后转染293A细胞,分别获得表达PCV2 Rep、Cap和ORF3蛋白的重组腺病毒,RT-PCR和western blotting检测显示重组腺病毒正确表达大小约为52 KDa、39 KDa和29 KDa的PCV2 Rep、Cap和ORF3蛋白。

4.PCV2和PCV1分别感染猪肺泡巨噬细胞,ELISA和双荧光素酶活性检测显示,与PCV1相比,PCV2感染能显著诱导猪肺泡巨噬细胞表达IL-10(p<0.01);Q-PCR检测显示,PCV2感染早期(0.5~3 h)和后期(12 h)均显著上调IL-10 mRNA水平(p<0.05,p<0.01),且后期水平显著高于早期(p<0.05);

western blotting和ChIP检测显示,PCV2感染早期激活p50/p50介导的NF-κB和Akt1介导的PI3K/Akt信号通路,后期进一步激活p38 MAPK和ERK信号通路,而PCV1仅能在感染后期激活NF-κB信号通路,对其它信号通路没有活化作用。

参考文献

[1]Molecular investigations on the prevalence and viral load of enteric viruses in pigs from five European countries[J].Weiguang Zhou,Karin Ullman,Vinay Chowdry,Márta Reining,Zsófia Benyeda,Claudia Baule,Mikael Juremalm,Per Wallgren,Lukas Schwarz,Enmin Zhou,Sonia Pina Pedrero,Isabel Hennig-Pauka,Joaquim Segales,Lihong Liu.Veterinary Microbiology.2016

[2]Expression,purification and antibody preparation of PCV2 Rep and ORF3 proteins[J].Zhiyuan Peng,Teng Ma,Daxing Pang,Dan Su,Fuwang Chen,Xinrong Chen,Ning Guo,Ting Ouyang,Hongsheng Ouyang,Linzhu Ren.International Journal of Biological Macromolecule.2016

[3]Characterization of specific antigenic epitopes and the nuclear export signal of the porcine circovirus 2 ORF3 protein[J].Jinyan Gu,Lun Wang,Yulan Jin,Cui Lin,Huijuan Wang,Niu Zhou,Gang Xing,Min Liao,Jiyong Zhou.Veterinary Microbiology.2016

[4]Study of the activated macrophage transcriptome[J].Vladimir V.Novoselov,Margarita A.Sazonova,Ekaterina A.Ivanova,Alexander N.Orekhov.Experimental and Molecular Pathology.2015(3)

[5]杜谦.猪圆环病毒2型对猪肺泡巨噬细胞IL-10/IL-12p40表达的影响及调控机制[D].西北农林科技大学,2016.