ANTI-HISTONE H3 (PHOSPHO T3)抗体的应用

背景^[1-3]

ANTI-HISTONE H3(PHOSPHO T3)抗体是一类可以特异性结合HISTONE H3(PHOSPHO T3)的多克隆抗体，主要用于检测HISTONE H3(PHOSPHO T3)的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

检测原理：双抗体夹心法测定标本中HISTONE H3(PHOSPHO T3)水平。用纯化的HISTONE H3(PHOSPHO T3)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入HISTONE H3(PHOSPHO T3)，再与HRP标记的HISTONE H3(PHOSPHO T3)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的HISTONE H3(PHOSPHO T3)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中HISTONE H3(PHOSPHO T3)浓度。

组蛋白赖氨酸甲基化受赖氨酸甲基转移酶(KMT)介导，并且会被赖氨酸脱甲基酶(KDM)去除。组蛋白H3的甲基化赖氨酸残基包括Lys4、9、27、36和79。每个赖氨酸残基可被单甲基化、二甲基化或三甲基化，并且每种甲基化状态似乎会发挥不同功能。

甲基化不会影响组蛋白电荷，相反，它会调节读取蛋白与其有关蛋白复合体的结合。例如，多梳阻遏蛋白复合体2(PRC2)三甲基化组蛋白H3 Lys27(H3K27me3)会为PRC1复合体产生结合位点，其中两者均能产生对转录具有阻遏性的致密染色质。

或者，H3K4me3是一种结合多种转录激活读取蛋白的标记物。甲基化赖氨酸残基会为含染色质域、MBT结构域、WD40结构域和PHD指结构的读取蛋白提供结合域。

应用^[4][5]

用于组蛋白H3K27三甲基化和乙酰化调控小鼠胚胎发育能力的研究

研究表观遗传模式对孤雌胚胎发育能力的影响,考察小鼠MⅡ期卵母细胞孤雌激活得到的植入前各时期孤雌激活胚胎的H3K27三甲基化和乙酰化模式与体内胚胎的差异,尝试对异常的表观遗传模式进行修正,以期探索抑制剂处理后对孤雌胚胎这两种表观遗传模式的影响,从而提高孤雌激活胚胎植入前各时期的发育能力及后期的着床能力。

对4-6周的成年昆明雌性小白鼠注射孕马血清激素(pregnant mare serum gonadotrophin,PMSG)和人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,hCG)进行超排后合笼,并根据胚胎的发育时程在不同时期采用体内冲胚的方式获得体内各时期胚胎；超排处理后不进行合笼处理,利用SrCl2激活小鼠MⅡ期卵母细胞,获得植入前各时期的孤雌激活胚胎,并统计各时期的胚胎发育率；

采用间接免疫荧光的方法在激光扫描共聚焦显微镜下检测各类胚胎各时期组蛋白H3K27三甲基化和乙酰化模式,并比较孤雌胚与体内正常组各时期胚胎表观遗传模式的差异；

尝试对孤雌胚表观遗传模式的差异进行修复,我们又采用了曲古抑菌素A(Trichostatin,TSA)及5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-AzaC)两种抑制剂分别对孤雌激活原核时期的胚胎进行不同的处理,然后检测各时期孤雌激活胚胎组蛋白H3K27三甲基化模式和H3K27乙酰化模式的变化

参考文献

[1]Epigenetic transgenerational actions of environmental factors in disease etiology[J].Michael K.Skinner,Mohan Manikkam,Carlos Guerrero-Bosagna.Trends in Endocrinology&Metabolism.2010(4)

[2]Epigenetics:molecular mechanisms and implications for disease[J].Adam E.Handel,George C.Ebers,Sreeram V.Ramagopalan.Trends in Molecular Medicine.2009(1)

[3]Genetic and epigenetic control of early mouse development[J].Mareike Albert,Antoine HFM Peters.Current Opinion in Genetics&Development.2009(2)

[4]Parkinson’s Disease Patient-Derived Induced Pluripotent Stem Cells Free of Viral Reprogramming Factors[J].Frank Soldner,Dirk Hockemeyer,Caroline Beard,Qing Gao,George W.Bell,Elizabeth G.Cook,Gunnar Hargus,Alexandra Blak,Oliver Cooper,Maisam Mitalipova,Ole Isacson,Rudolf Jaenisch.Cell.2009(5)

[5]王彩红.组蛋白H3K27三甲基化和乙酰化调控小鼠胚胎发育能力的研究[D].安徽大学,2014.