ANTI-HISTONE H3 (PHOSPHO T118)抗体的应用

背景^[1-3]

ANTI-HISTONE H3(PHOSPHO T118)抗体是一类可以特异性结合HISTONE H3(PHOSPHO T118)的多克隆抗体，主要用于检测HISTONE H3(PHOSPHO T118)的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

检测原理：双抗体夹心法测定标本中HISTONE H3(PHOSPHO T118)水平。用纯化的HISTONE H3(PHOSPHO T118)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入HISTONE H3(PHOSPHO T118)，再与HRP标记的HISTONE H3(PHOSPHO T118)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的HISTONE H3(PHOSPHO T118)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中HISTONE H3(PHOSPHO T118)浓度。

组蛋白（histone）是指所有真核生物的细胞核中，与DNA结合存在的碱性蛋白质的总称。其分子量约10000～20000Kda。

真核生物体细胞染色质中的碱性蛋白质，含精氨酸和赖氨酸等碱性氨基酸特别多，二者加起来约为所有氨基酸残基的1/4。组蛋白与带负电荷的双螺旋DNA结合成DNA-组蛋白复合物。因氨基酸成分和分子量不同，主要分成5类。

亲缘关系较远的种属中，四种组蛋白（H2A、H2B、H3、H4）氨基酸序列都非常相似，如海胆组织H3的氨基酸序列与来自小牛胸腺的H3的氨基酸序列间只有一个氨基酸的差异，小牛胸腺的H3的氨基酸序列与豌豆的H3也只有4个氨基酸不同。不同生物的H1序列变化较大，在某些组织中，H1被特殊的组蛋白所取代。

应用^[4][5]

用于PI3K/AKT和MEK/ERK通路调控H3K27me3甲基化酶和去甲基化酶基因表达的研究

用小鼠成肌细胞C2C12为研究材料，采用免疫印迹、染色质免疫共沉淀（Chromatinimmunoprecipitation，CHIP)、定量PCR（Q-PCR）的方法研究PI3K/AKT信号通路在成肌细胞分化阶段对组蛋白H3K27甲基化酶EZH1/EZH2和去甲基化酶UTX/JMJD3的表达调控。此外，在多种肿瘤组织中检测到EZH2存在过表达的现象，UTX和JMJD3也被检测到发生突变或者表达下降。MEK/ERK信号通路是生物体内广泛存在的一条信号通路，参与调控细胞的生长、增殖、分化和凋亡等生命过程。

在某些癌症细胞中，MER/ERK信号通路参与调控EZH2基因的表达。为了进一步研究这条通路对组蛋白甲基化酶和去甲基化酶的调控。我们以C2C12、C127、NIH3T3、HEPA1-61-6、RD五种细胞系为研究对象，用RT-PCR和Western-Bloting方法分析检测MER-ERK信号通路对组蛋白H3K27甲基化酶EZH2/EZH1基因和去甲基化酶UTX/JMJD3基因的表达。

结果如下：磷酸化的AKT在成肌细胞分化过程中逐渐升高，EZH1和JMJD3蛋白表达变化不明显，EZH2蛋白表达降低，到第6和第7d蛋白降到最低值，UTX蛋白表达升高。

成肌细胞分化过程中用PI3K/AkT信号通路激活剂处理24h后，Myogenin和MCK蛋白表达升高，H3K27me3在Myogenin基因启动子区和MCK基因启动子及增强子区的富集与对照组相比降低。

参考文献

[1]RAS oncogenic signal upregulates EZH2 in pancreatic cancer[J].Satoshi Fujii,Katsumi Fukamachi,Hiroyuki Tsuda,Kosei Ito,Yoshiaki Ito,Atsushi Ochiai.Biochemical and Biophysical Research Communications.2011(3)

[2]The chromatoid body of male germ cells:Epigenetic control and miRNA pathway[J].Ippei Nagamori,Paolo Sassone-Corsi.Cell Cycle.2008(22)

[3]EZH1 Mediates Methylation on Histone H3 Lysine 27 and Complements EZH2 in Maintaining Stem Cell Identity and Executing Pluripotency[J].Xiaohua Shen,Yingchun Liu,Yu-Jung Hsu,Yuko Fujiwara,Jonghwan Kim,Xiaohong Mao,Guo-Cheng Yuan,Stuart H.Orkin.Molecular Cell.2008(4)

[4]ATP-dependent chromatin remodeling enzymes:two heads are not better,just different[J].Lisa R Racki,Geeta J Narlikar.Current Opinion in Genetics&Development.2008(2)

[5]李晶.PI3K/AKT和MEK/ERK通路调控H3K27me3甲基化酶和去甲基化酶基因表达的研究[D].石河子大学,2013.