ANTI-TRAIL抗体的应用

背景^[1-3]

ANTI-TRAIL抗体是一类可以特异性结合ANTI-TRAIL的多克隆抗体，主要用于检测ANTI-TRAIL的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

检测原理：双抗体夹心法测定标本中ANTI-TRAIL水平。用纯化的ANTI-TRAIL抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入ANTI-TRAIL，再与HRP标记的ANTI-TRAIL抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的ANTI-TRAIL呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中ANTI-TRAIL浓度。

TRAIL属于II型跨膜蛋白,含有281个氨基酸(鼠科动物有291个)。膜结合的TRAIL可以被半胱氨酸蛋白酶切割,形成可溶性TRAIL进入外周循环。可溶性TRAIL主要来源于激活的白细胞,如单核细胞和中性粒细胞。

可溶性的TRAIL通过其230位的半胱氨酸残基与二价锌离子相互螯合,促进TRAIL形成有活性的同源三聚体,进而与相应的受体结合发挥不同的生物学效应。TRAIL有强大的抗肿瘤活性,并且作为癌症治疗靶点已进入临床试验阶段。TRAIL除了可诱导肿瘤细胞凋亡,对心血管系统也有强大的保护效应,例如TRAIL基因缺失会增加高血脂小鼠的动脉粥样硬化斑块面积。

然而在体外实验中发现,一定剂量的TRAIL同样可以刺激内皮细胞凋亡,VSMCs增殖和迁移,泡沫细胞形成等,这些结果提示增加TRAIL用量也会促进血管炎症反应,导致动脉粥样硬化等不良效应。

应用^[4][5]

用于雌激素通过TRAIL抑制TNF-α诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移的机制研究

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(Tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)可调节心血管功能。TRAIL作为细胞因子TNF家族的同系物,最早于20年前被发现,也被称为Apo-2配体(Apo-2L)或TNF超家族10(TNFSF10)。

TRAIL与Fas有23%同源性,与TNG-a有19%同源性。人的TRAIL属于II型跨膜蛋白,含有281个氨基酸(鼠科动物有291个)。膜结合的TRAIL可以被半胱氨酸蛋白酶切割,形成可溶性TRAIL进入外周循环。可溶性TRAIL主要来源于激活的白细胞,如单核细胞和中性粒细胞。

可溶性的TRAIL通过其230位的半胱氨酸残基与二价锌离子相互螯合,促进TRAIL形成有活性的同源三聚体,进而与相应的受体结合发挥不同的生物学效应。TRAIL有强大的抗肿瘤活性,并且作为癌症治疗靶点已进入临床试验阶段。TRAIL除了可诱导肿瘤细胞凋亡,对心血管系统也有强大的保护效应,例如TRAIL基因缺失会增加高血脂小鼠的动脉粥样硬化斑块面积。

然而在体外实验中发现,一定剂量的TRAIL同样可以刺激内皮细胞凋亡,VSMCs增殖和迁移,泡沫细胞形成等,这些结果提示增加TRAIL用量也会促进血管炎症反应,导致动脉粥样硬化等不良效应。

对VSMCs中TNF-a诱导的TRAIL表达影响为了探讨E2对VSMCs中TNF-a诱导的TRAIL表达影响,分别采用ELISA和实时荧光定量PCR方法检测TRAIL蛋白和mRNA表达水平,并用MTT法和细胞划痕实验观察E2对TNF-a诱导的VSMCs增殖和迁移的影响。

参考文献

[1]Estrogen receptorβactions in the female cardiovascular system:A systematic review of animal and human studies[J].Taulant Muka,Kris G.Vargas,Loes Jaspers,Ke-xin Wen,Klodian Dhana,Anna Vitezova,Jana Nano,Adela Brahimaj,Veronica Colpani,Arjola Bano,Bledar Kraja,Asija Zaciragic,Wichor M.Bramer,Gaby M.van Dijk,Maryam Kavousi,Oscar H.Franco.Maturitas.2016

[2]Vascular nitric oxide:Beyond eNOS[J].Yingzi Zhao,Paul M.Vanhoutte,Susan W.S.Leung.Journal of Pharmacological Sciences.2015(2)

[3]17β-Estradiol inhibits vascular smooth muscle cell migration via up-regulation of striatin protein[J].Shuhui Zheng,Xi Chen,Shubin Hong,Lingli Long,Yuxia Xu,Tommaso Simoncini,Xiaodong Fu.Gynecological Endocrinology.2015(8)

[4]Inducible Nitric Oxide Synthase as a Possible Target in Hypertension[J].Gustavo H.Oliveira-Paula,Riccardo Lacchini,Jose E.Tanus-Santos.Current Drug Targets.2014(2)

[5]李恒昌.雌激素通过TRAIL抑制TNF-α诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移的机制研究[D].南方医科大学,2016.