人脂肪酸合成酶(FAS)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

人脂肪酸合成酶(FAS)ELISA试剂盒是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人脂肪酸合成酶(FAS)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人脂肪酸合成酶(FAS)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

FAS,也称APO-1,CD95,TNFRSF6。是一种细胞表面受体，将FASL的信号传导入细胞内。是一个分子量43-48KDa的糖蛋白。它属于TNF受体家族，和TNFR1有共同的“死亡区”，结合细胞内分子，启动细胞内凋亡过程。在上皮细胞、肝细胞、成熟淋巴细胞和肿瘤细胞有高表达。人的FAS cDNA编码325个氨基酸的1型膜蛋白质，有多种亚型存在。可溶性FAS缺乏跨膜区。本试剂盒所用的标准品为FAS的细胞外片段(1-173aa)，加上融合的人IgG1的Fc区，分子量约为45KDa。

人脂肪酸合成酶(FAS)ELISA试剂盒品牌操作步骤：

1、从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2、设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3、样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4、除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5、弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6、每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7、每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于淫羊藿素通过抑制脂肪酸合成酶活性诱导肿瘤细胞凋亡和生长抑制研究

淫羊藿素与肿瘤关系的研究仅局限于其通过拟雌激素样作用促进雌激素受体阳性癌细胞增殖。在对上述黄酮类化合物的研究中发现它们具有一个共同的作用靶点——脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)。

FAS是1994年Kuhajda等发现的一种癌基因抗原-519,是脂肪酸合成的关键酶,其终产物为软脂酸(palmitic acid,PA)。后者作为组成细胞膜脂的基础物质,其含量的多寡直接影响着细胞增殖的速度。

在正常情况下,FAS除在肝脏中高表达参与脂类物质的合成外,在其他人体组织中含量很低。肿瘤细胞FAS表达增高顺应了肿瘤细胞无限生长的特性,为肿瘤细胞的生长增殖提供了原料。

人表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor-2,HER2)是肿瘤细胞过表达的另一个基因。HER2为酪氨酸激酶受体,属于erbB家族,与上皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)非常相似,参与调节细胞的生长与分化。HER2在多种肿瘤细胞中都有表达,HER2过表达可使肿瘤细胞对化疗药物产生耐药性,并与肿瘤患者的预后不良有关。

参考文献

[1]Expression of fatty acid synthase,ErbB2 and Ki-67 in head and neck squamous cell carcinoma.A clinicopathological study[J].Sabrina D Silva,Michelle Agostini,Inês N Nishimoto,Ricardo D Coletta,Fábio A Alves,Márcio A Lopes,Luiz P Kowalski,Edgard Graner.Oral Oncology.2004(7)

[2]DIETARY FLAVONOIDS:Bioavailability,Metabolic Effects,and Safety[J].Julie A.Ross,Christine M.Kasum.Annual Review of Nutrition.2002

[3]CI-1033,a pan-erbB tyrosine kinase inhibitor[J].William J Slichenmyer,William L Elliott,David W Fry.Seminars in Oncology.2001

[4]Anticancer therapy targeting the erbB family of receptor tyrosine kinases[J].William J Slichenmyer,David W Fry.Seminars in Oncology.2001

[5]张妤.淫羊藿素通过抑制脂肪酸合成酶活性诱导肿瘤细胞凋亡和生长抑制[D].第二军医大学,2009.