兔抗GSK3 BETA多克隆抗体的应用

背景^[1-3]

兔抗GSK3 BETA多克隆抗体是一类可以特异性结合GSK3 BETA的多克隆抗体，主要用于检测GSK3 BETA的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

检测原理：双抗体夹心法测定标本中GSK3 BETA水平。用纯化的GSK3 BETA抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入GSK3 BETA，再与HRP标记的GSK3 BETA抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的GSK3 BETA呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中GSK3 BETA浓度。

GSK-3β的生物学特性：GSK-3最早在兔骨骼肌的分次提取物中被分离出来，主要有两种亚型，即GSK-3α和GSK-3β，二者在催化区域具有98%的同源性，于N-和C-末端略有不同。

糖原合成酶激酶-3(GSK-3)是一种在进化上非常保守的丝氨酸/苏氨酸激酶，普遍存在于哺乳动物真核细胞中，除去最早发现的调控糖原合成酶(GS)的活性外，GSK-3β还能作用于众多信号蛋白结构蛋白和转录因子，调节细胞的分化、增殖、存活和凋亡.在癌症神经退行性疾病神经精神类疾病等多种重大疾病的研究中，选择其作为治疗靶点，受到越来越多研究者的重视。

GSK-3β是参与肝糖代谢的关键酶，通过磷酸化GS抑制其活性，降低肝糖的合成，使体内血糖浓度升高，在胰岛素信号通路中受控于胰岛素，参与肝糖的合成代谢。同时，GSK-3β通过影响血液中葡萄糖的浓度，还可调控Bax/HKII的比例，进而影响线粒体渗透性及细胞色素C的释放，参与细胞凋亡的调控。

应用^[4][5]

用于颈部降温通过PI3K/Akt/GSK-3β信号通路减轻心肺复苏后兔脑损伤及抑制凋亡的机制研究

研究PI3K/Akt/GSK3β信号通路在颈部降温的调节作用，初步探讨颈部降温的脑保护作用是否与PI3K/Akt及GSK3β的磷酸化有关。

方法：健康雄性新西兰家兔随机分为5组，采用4min室颤模型。按照复苏后4、9、24小时不同时间点再分别分成3个亚组

（1）假手术组：常规手术操作置管，不诱导CA，于术后30分钟处死取标本。（2）常温复苏组（normothermia theat NT组）：常规致颤复苏并于4、9、24小时时间点处死动物取标本。

（2）复苏中降温组（intra-arresttherapeutic hypothermia IATH组）：于心肺复苏同时启动颈部快速降温，目标脑温为34℃，以后维持目标脑温至ROSC后4小时。于4、9、24小时时间点处死动物取标本。

（3）复苏中降温+LY294002（LY294002组）：复苏前20分钟脑室注射LY294002，余同组3。

（4）复苏后1小时降温组（post-arrest therapeutic hypothermia PATH组），于心肺复苏后1小时启动颈部快速降温，目标脑温为34℃，余同组3。LY294002溶于DMSO稀释成10μM，在动物脑立体定位仪下在ROSC前20min前给予脑室内注射，其余各组给予溶剂DMSO。动物分别4h、9h、24h过量麻醉处死，采集标本，若复苏失败或在相应时间点之前发生死亡的，该动物的实验数据不录用，另外进行补充动物实验，保证各组5只动物。

应用Western blotting检测Akt、p-Akt、GSK-3β、p-GSK-3β(ser9)、的蛋白表达，运用TUNEL等方法观察各组组织凋亡变化。结果：与Sham组比较，常温心肺复苏组兔脑细胞胞质中的Akt(Thr-308)磷酸化水平（P-AKT）和P-GSK3β在心肺复苏后4、9、24小时明显减低，并呈逐步减低趋势(p<O．05)；

复苏后即刻颈部降温组P-AKT和P-GSK3β水平在心肺复苏后4、9、24小时各时间点均较常温复苏组明显增强(p<O.05)；复苏后1小时降温组的蛋白表达水平各时间点也较常温复苏组有增强(p<O.05)，但弱于复苏后即刻颈部降温组。

参考文献

[1]Hypothermia-Induced Neuroprotection is Associated with Reduced Mitochondrial Membrane Permeability in a Swine Model of Cardiac Arrest[J].Ping Gong,Rong Hua,Yu Zhang,Hong Zhao,Ziren Tang,Xue Mei,Mingyue Zhang,Juan Cui,Chunsheng Li.Journal of Cerebral Blood Flow&Metabolism.2013(6)

[2]Ultrafast and Whole-Body Cooling With Total Liquid Ventilation Induces Favorable Neurological and Cardiac Outcomes After Cardiac Arrest in Rabbits[J].M.Chenoune,F.Lidouren,C.Adam,S.Pons,L.Darbera,P.Bruneval,B.Ghaleh,R.Zini,J.-L.Dubois-Randé,P.Carli,B.Vivien,J.-D.Ricard,A.Berdeaux,R.Tissier.Circulation.2011(8)

[3]State of the Art in Therapeutic Hypothermia[J].Joshua W.Lampe,Lance B.Becker.Annual Review of Medicine.2011

[4]Intra-Arrest Transnasal Evaporative Cooling:A Randomized,Prehospital,Multicenter Study(PRINCE:Pre-ROSC IntraNasal Cooling Effectiveness)[J].Circulation.2010(7)

[5]张浙.颈部降温通过PI3K/Akt/GSK-3β信号通路减轻心肺复苏后兔脑损伤及抑制凋亡的机制研究[D].第二军医大学,2014.