Anti-pan-AKT抗体的应用

背景^[1-3]

Anti-pan-AKT抗体是一类可以特异性结合AKT的单克隆抗体，主要用于检测AKT的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

检测原理：双抗体夹心法测定标本中AKT水平。用纯化的AKT抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入AKT，再与HRP标记的AKT抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的AKT呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中AKT浓度。

蛋白激酶B，即Akt，又称PKB或Rac，在细胞存活和凋亡中起重要作用。胰岛素等生长和存活因子都可以激活Akt信号途径。Akt的Thr308可以被PDK1磷酸化。

PI3 Kinase-Akt信号途径是一条经典的信号途径，LY294002等PI3 kinase的抑制剂抑制PI3 kinase时，通常就会抑制Akt激活。

AKT1基因编码的是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，可通过磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）依赖的机制被胞外信号激活，目前发现AKT家族有三个成员，分别为AKT1/PKBα、AKT2/PKBβ和AKT3/PKBγ。

AKT则是PI3K/AKT信号通路中核心因子，PI3Ks能特异性磷酸化磷脂酰肌醇（PI）的3位羟基，产生第二信使肌醇类物质如PIP3，PIP3可促使AKT转移到细胞膜上并被PDK1/PDK2活化，活化的AKT重新定位到细胞质、细胞核或细胞内其它部位，磷酸化大量的底物蛋白，进而调节细胞的功能，异常活化的AKT会导致肿瘤发生。

应用^[4][5]

用于基于PI3K/Akt/NF-κb信号通路槲皮素抗动脉粥样硬化作用研究

应用形态学、生物化学、免疫细胞化学、免疫组织化学、流式细胞术、Western blotting及RT-PCR等实验技术,通过体内、体外相互印证的研究路线,探讨了动脉粥样硬化大鼠胸主动脉病理变化及机制,并对体外培养的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)用槲皮素进行干预,检测了PI3K/Akt/NF-κb信号通路的主要蛋白表达,以期对槲皮素抗动脉粥样硬化作用及机制进行初步探讨。

体内实验结果表明,腹腔注射维生素D3(vitamine D3,VD3)70 U/kg体重联合高脂饲料喂养可成功复制大鼠动脉粥样硬化模型,表现为胸主动脉出现动脉粥样硬化病变,而槲皮素干预可有效改善动脉粥样硬化引起的脂代谢紊乱,减轻动脉粥样硬化病理改变,改善动脉壁结构,同时可显著抑制动脉粥样硬化时VSMCs及成纤维细胞的增殖以及由二者的增殖导致的动脉壁胶原成分增加,延缓动脉粥样硬化的进展。

VSMCs体外培养结果表明,槲皮素在体外可有效抑制VSMCs增殖,并抑制胶原的合成和分泌,其机制可能与槲皮素激活PI3K/Akt/NF-κb信号通路,上调磷酸化PI3K及Akt表达,进而抑制NF-κb向核内转运有关。

总之,体内外实验结果均显示,动脉粥样硬化时,PI3K/Akt/NF-κb通路可能被激活,促进主动脉壁成纤维细胞、平滑肌细胞增殖及胶原等成分的合成与分泌,加速动脉硬化进程;

而槲皮素治疗动脉粥样硬化除影响脂代谢途径外,也可能干预此通路中关键蛋白的活性、抑制NF-κb转移,抑制主动脉壁成纤维细胞、平滑肌细胞增殖及胶原等成分的合成与分泌,延缓动脉硬化进程。

参考文献

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