植物蛋白提取试剂盒的应用

背景^[1-3]

植物蛋白提取试剂盒用于植物组织中提取总蛋白，试剂盒中的裂解液含有蛋白酶抑制剂，作用温和，可快速获得总蛋白，可用于免疫印迹实验等基础研究实验，由于含有酶抑制剂，不能用于研究蛋白激酶的研究。

植物蛋白质的提取方法基本上有这几种：盐析法、有机溶剂法和等电点法。

1、盐析法

原理：盐析法是指在溶液中加入大量的无机盐，可使蛋白溶解度降低沉淀析出。盐析法主要用于蛋白质的分离纯化。常作盐析的无机盐有硫酸钠、硫酸镁、硫酸铵等。

2、有机溶剂法

原理：机溶剂引起蛋白质沉淀的主要原因是加入有机溶剂使水溶液的介电常数降低，因而增加了两个相反电荷基团之间的吸引力，促进了蛋白质分子的聚集和沉淀。有机溶剂引起蛋白质沉淀的另一种解释认为与盐析相似，有机溶剂与蛋白质争夺水分子，致使蛋白质脱除水化膜，而易于聚集形成沉淀。

3、等电点法

原理：在等电点时，蛋白质分子以两性离子形式存在，其分子净电荷为零(即正负电荷相等)，此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥，分子相互之间的作用力减弱，其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀，所以蛋白质在等电点时，其溶解度最小，最易形成沉淀物。等电点时的许多物理性质如黏度、膨胀性、渗透压等都变小，从而有利于悬浮液的过滤。

操作方法:

植物组织蛋白的提取

1.取100-200mg的植物组织放入液氮中，在液氮环境中将植物组织碾碎；

2.加入1ml的裂解液，4℃裂解20min，期间每隔5min震荡1次；4℃，14000转离心30min；

3.吸取上清至新的管中进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。

应用^[4][5]

用于核桃蛋白质的结构表征及其制品的改性研究

对核桃蛋白质的结构表征及其制品的改性进行了研究，深入考察了核桃蛋白质及其分离组分的组成与结构，核桃蛋白质分离提取及制备与等电点，核桃分离蛋白和浓缩蛋白的结构与功能性以及有限酶水解核桃分离蛋白的机理。对核桃蛋白质及其分离组分的重要物理化学参数进行了表征，深入研究了核桃蛋白质的组成与结构。

结果显示，核桃蛋白质进行组分分离得到清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白、谷蛋白，其含量分别是7.54%，15.67%，4.73%，72.06%。谷蛋白是构成核桃蛋白组成的主要部分。核桃脱脂粉和核桃蛋白分离组分的氨基酸组成中，以谷氨酸、精氨酸、天冬氨酸含量较高，且主要以酸性氨基酸和疏水性氨基酸为主，赖氨酸是核桃脱脂粉、清蛋白、球蛋白、谷蛋白的限制氨基酸，而亮氨酸为醇溶蛋白的限制性氨基酸。

核桃脱脂粉的分子量分布比较宽，其分子量分布范围是3.54kDa~81.76kDa之间。其中，球蛋白在11.25kDa~78.60kDa之间，谷蛋白在14.25kDa左右，清蛋白在3.63kDa~67.14kDa之间，醇溶蛋白在13.17kDa左右。核桃蛋白质的亚基组成比较复杂，非还原电泳图显示有11个条带，分子量范围在14kDa~120kDa之间，还原条件下肽链分子量范围在14kDa~60kDa之间，其中，相对分子量为30kDa~43kDa和20kDa~28kDa的为酸性肽链，相对分子量为14.4kDa~20.1kDa的为碱性肽链。球蛋白显示有9个条带，分子量范围在20kDa~120kDa之间；清蛋白显示有8个条带，分子量范围在14kDa~60kDa之间；

谷蛋白显示有5个条带，分子量范围在14kDa~60kDa之间。核桃蛋白分离组分的电泳条带分子量范围与核桃蛋白质基本吻合。核桃蛋白的组成蛋白等电点主要集中在pI4.8~6.8之间，即以酸性蛋白为主，少数的蛋白是碱性蛋白，pI8.4~9.0。

参考文献

[1]Effects of glutaminase deamidation on the structure and solubility of rice glutelin[J].Yongle Liu,Xianghong Li,Xiaoling Zhou,Jian Yu,Faxiang Wang,Jianhui Wang.LWT-Food Science and Technology.2011(10)

[2]Physicochemical and functional properties of lentil protein isolates prepared by different drying methods[J].M.Joshi,B.Adhikari,P.Aldred,J.F.Panozzo,S.Kasapis.Food Chemistry.2011(4)

[3]Enzymatic hydrolysis and their effects on conformational and functional properties of peanut protein isolate[J].Guanli Zhao,Yan Liu,Mouming Zhao,Jiaoyan Ren,Bao Yang.Food Chemistry.2011(4)

[4]Recent advances in phosphorylation of food proteins:A review[J].Can-Peng Li,Hirofumi Enomoto,Yoko Hayashi,Hui Zhao,Takayoshi Aoki.LWT-Food Science and Technology.2010(9)

[5]毛晓英.核桃蛋白质的结构表征及其制品的改性研究[D].江南大学,2012.