小鼠肺泡巨噬细胞的应用

背景^[1-3]

小鼠肺泡巨噬细胞分离自肺组织；肺是机体的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆盖于心之上。肺有分叶，左二右三，共五叶。肺经肺系（指气管、支气管等）与喉、鼻相连，故称喉为肺之门户，鼻为肺之外窍。肺泡由单层上皮细胞构成的半球状囊泡。肺中的支气管经多次反复分枝成无数细支气管，它们的末端膨大成囊，囊的四周有很多突出的小囊泡，即为肺泡。

巨噬细胞属免疫细胞，有多种功能，是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。

巨噬细胞较易获得，便于培养，并可进行纯化。巨噬细胞属不繁殖细胞群，在条件适宜下可生活2-3周，多用做原代培养，难以长期生存。巨噬细胞（Macrophages）是一种位于组织内的白血球，源自单核细胞，而单核细胞又来源于骨髓中的前体细胞。

巨噬细胞和单核细胞皆为吞噬细胞，在脊椎动物体内参与非特异性防卫（先天性免疫）和特异性防卫（细胞免疫）。

它们的主要功能是以固定细胞或游离细胞的形式对细胞残片及病原体进行噬菌作用（即吞噬以及消化），并激活淋巴球或其他免疫细胞，令其对病原体作出反应。肺泡巨噬细胞的吞噬、免疫和分泌作用都十分活跃，有重要防御功能。肺泡是重要的巨噬细胞储存器官，为结核病的研究提供了重要的材料。

应用^[4][5]

用于冬虫夏草菌菌丝体甲醇提取物对LPS所致大鼠肺泡巨噬细胞炎性反应的抑制作用研究

冬虫夏草(Cordyceps sinensis)是一味名贵的中药材，具有补肺益肾的功效。研究了冬虫夏草无性型—冬虫夏草菌(Ophiocordyceps sinensis)人工培养菌丝体甲醇提取物对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肺泡巨噬细胞炎性反应的抑制活性，分析了对LPS所致炎症介质NO的产生，并测定了MAPK通路中p38蛋白磷酸化的调控，探讨冬虫夏草菌的抗炎活性和机制。

方法：首先采用MTT法检测冬虫夏草菌甲醇提取物(OSME)对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383细胞系的毒性作用，用Griess法检测OSME对LPS诱导的炎症介质一氧化氮(NO)产生的影响。

用免疫印迹法(Western Blot)检测OSME对LPS刺激调控的p38蛋白及其磷酸化蛋白p-p38水平的影响。

结果：OSME在25-400μg/mL范围内不显示对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的细胞毒性。OSME在25-200μg/mL浓度范围内能剂量依赖性地下调LPS所致NO的产生。在25、50、100μg/mL浓度时，OSME对LPS刺激的大鼠肺泡巨噬细胞的p38蛋白表达水平没有影响，但可剂量依赖性地下调因LPS所致的p38大量磷酸化。结论：冬虫夏草菌丝体提取物对大鼠肺泡巨噬细胞的炎症反应有抑制作用，其作用机制可能与调控p38MAPK通路有关。

参考文献

[1]Role of lipid rafts in innate immunity and phagocytosis of polystyrene latex microspheres[J].Goshi Nagao,Kazuo Ishii,Keiji Hirota,Kimiko Makino,Hiroshi Terada.Colloids and Surfaces B:Biointerfaces.2011(2)

[2]Anti-inflammatory effects of sophocarpine in LPS-induced RAW 264.7 cells via NF-κB and MAPKs signaling pathways[J].Yonglin Gao,Wanglin Jiang,Chaohua Dong,Chunmei Li,Xuejun Fu,Li Min,Jingwei Tian,Haizhu Jin,Jingyu Shen.Toxicology in Vitro.2011(1)

[3]Age-induced augmentation of p38 MAPK phosphorylation in mouse lung[J].Zongli Li,Junfa Li,Xiangning Bu,Xu Liu,Clarke G.Tankersley,Chen Wang,Kewu Huang.Experimental Gerontology.2011(8)

[4]Phosphatidylserine inhibits NFκB and p38 MAPK activation in human monocyte derived dendritic cells[J].Kara Doffek,Xiao Chen,Sonia L.Sugg,Joel Shilyansky.Molecular Immunology.2011(15)

[5]张颖茁.冬虫夏草菌菌丝体甲醇提取物对LPS所致大鼠肺泡巨噬细胞炎性反应的抑制作用[D].上海师范大学,2013.