BSA标准试剂盒的应用

背景^[1-3]

BSA标准试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗BSA检测试剂盒抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的BSA检测试剂盒与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗BSA检测试剂盒抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。

抗BSA检测试剂盒抗体与结合在包被抗体上的BSA检测试剂盒结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，BSA检测试剂盒浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中BSA检测试剂盒的浓度。

牛血清白蛋白（BSA），是牛血清中的一种球蛋白，包含607个氨基酸残基，分子量为66.446KDa，等电点为4.7。牛血清白蛋白在生化实验中有广泛的应用。BSA一般做为稳定剂被用于限制酶或者修饰酶的保存溶液和反应液中，因为有些酶在低浓度下不稳定或活性低。加入BSA后，它可能起到“保护”或“载体”作用，不少酶类添加BSA后能使其活性大幅度提高。不需要加BSA的酶加入BSA一般不会受到什么影响。

对多数底物DNA而言，BSA可以使酶切更完全，并可实现重复切割。在37℃，酶切反应超过1h时，BSA可以使酶更加稳定，因为在不含BSA的反应缓冲液中，许多限制性内切酶在37℃下只能存活10"20min甚至更短的时间。而BSA可以结合缓冲液或底物DNA中抑制限制性内切酶活性的金属离子和其它化学物质。

应用^[4][5]

用于牛血清白蛋白—高分子结合体的制备及在肿瘤诊疗中的应用研究

近年来，血清白蛋白作为一种新型的生物材料，因其良好的生物相容性、精确的几何结构，且易于功能化，在纳米医药领域受到越来越多的关注。本文选用牛血清白蛋白(BSA)作为基材，从分子设计角度，制备出一种新型的蛋白质-高分子结合体，并对其自组装行为及在癌症化疗、核素治疗和荧光成像中的应用进行了研究。

具体研究内容如下：（1）双亲性BSA-聚己内酯(PCL)结合体的合成与结构性能表征。本文通过开环聚合(ROP)，合成了端基马来酰亚胺化的PCL，并利用马来酰亚胺与BSA的自由巯基之间的迈克尔加成反应，制备出新型BSA-PCL结合体。通过核磁共振仪、基质辅助激光解吸附串联时间飞行质谱仪(MALDI-TOF MS)和SDS-PAGE凝胶电泳等对合成产物进行表征，并利用透射电子显微镜(TEM)和动态光散射(DLS)等进一步研究了该结合体的组装性能。结果显示，BSA-PCL结合体被成功制备，且具有双亲性，在水中可以组装得到不同形貌的纳米组装体。

（2）基于BSA-PCL结合体的纳米靶向药物载体的构建。利用制备的双亲性BSA-PCL结合体，通过自组装技术，构建了包载抗癌药物阿霉素的纳米高分子脂质体，并利用表面含有的功能基团，对高分子脂质体进行表面靶向修饰。采用U251细胞和MAD-MB-231细胞对构建的纳米载体的细胞内吞和细胞毒性进行了评估。结果表明，相比于未修饰的高分子脂质体，经西妥昔单抗修饰的高分子脂质体具有更好的进胞效果。

参考文献

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[3]Nanomedicine metaphors:From war to care.Emergence of an oecological approach[J].Sacha Loeve,Bernadette Bensaude Vincent,Florence Gazeau.Nano Today.2013

[4]A Controlled‐Release Nanocarrier with Extracellular pH Value Driven Tumor Targeting and Translocation for Drug Delivery[J].Zilong Zhao,Hongmin Meng,Nannan Wang,Michael J.Donovan,Ting Fu,Mingxu You,Zhuo Chen,Xiaobing Zhang,Weihong Tan.Angew.Chem.Int.Ed..2013(29)

[5]刘中云.牛血清白蛋白—高分子结合体的制备及在肿瘤诊疗中的应用[D].天津大学,2014.