晚期糖基化终末产物特异性受体(抗体)的应用

背景^[1-3]

晚期糖基化终末产物特异性受体(抗体)是可以特异性结合晚期糖基化终末产物的一类多克隆抗体，主要用于检测晚期糖基化终末产物的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

AGEs是以蛋白质、脂肪及核酸的氨基和还原糖（葡萄糖、果糖、戊糖等）为原料，发生非酶催化反应，生成的稳定的共价化合物。

晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products，AGEs）晚期糖基化终产物是一组在蛋白质、脂肪酸或核酸的氨基基团与还原糖的醛基之间发生非酶性糖基化反应(又称Maillard反应）所形成的一系列具有高度活性终产物的总称，其结构具有高度异质性。

该反应又称为Maillard反应。其具体形成过程如下：①大分子末端的还原性氨基与葡萄糖等还原糖分子中的醛基进行加成形成可逆的Schiff bases，反应迅速且高度可逆。形成的Schiff bases的数量主要取决于葡萄糖的浓度，当葡萄糖被清除、浓度下降时，Schiff bases将在数分钟内发生逆转;②经数天后，不稳定的Schiff bases逐渐发生Amadori重排反应并形成相对稳定的醛胺类产物，此过程发生得较为缓慢，但快于其逆反应，因此Amadori产物能在蛋白质上积聚，并在数周内达到平衡。Amadori产物的数量与葡萄糖的浓度相关。

AGEs在体内的积聚引发糖尿病的各种并发症。血管的基质成分胶原蛋白糖基化并交联；LDL与AGEs形成AGEs-LDL后，LDL的清除受障碍，体内脂质增加；内皮下单核细胞受体与AGEs结合，单核细胞分泌细胞因子都会增加血管粥样硬化发生的机会。

应用^[4][5]

探讨了RAGE对于乳腺癌的生物学行为变化的影响。

方法：本研究分为体外和体内研究两个部分。体外研究中,选择乳腺癌细胞系MDA-MB-231(三阴性)、SK-Br-3(HER2阳性)和MCF-7(ER阳性)作为研究对象,靶向RAGE的siRNA可降低这三种细胞系中RAGE基因的表达。

实时荧光定量PCR和Western blot检测RAGE,NF-κB P65,Cyclin D1和PCNA的表达。MTT法和细胞周期分析法探讨了RAGE敲低对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。

另一方面,在体内研究中,通过将21只裸鼠随机分为六组：分别为RAGE-siRNA组、RAGE-siRNA+Doxorubicin组、Negative RNA+Doxorubicin组、Doxorubicin组、Negative siRNA组以及空白对照组,通过游标卡尺测量、生物发光成像(BLI)和磁共振成像(MRI)监测移植至裸鼠体内的肿瘤生长情况。随后通过免疫组化(IHC)分析肿瘤样本中RAGE,PCNA,CyclinD1和NF-κB p65的表达水平。

结果：发现RAGE的表达水平与乳腺癌的严重程度相关。此外,下调RAGE表达可以使体外培养的三种乳腺癌细胞系(MDA-MB-231,SK-Br-3和MCF-7)的增殖水平下降并且可抑制移植到裸鼠体内的肿瘤生长。

靶向RAGE的siRNA可将细胞阻滞在G1期并且抑制DNA的合成(P<0.05)。此外,实时荧光定量PCR,Western blot和免疫组化结果显示,靶向RAGE的siRNA可降低核转录因子NF-κB p65、细胞增殖标记PCNA和CyclinD1的表达。

参考文献

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[3]Most Basal-like Breast Carcinomas Demonstrate the Same Rb?/p16+Immunophenotype as the HPV-related Poorly Differentiated Squamous Cell Carcinomas Which They Resemble Morphologically[J].Andrea Proctor Subhawong,Ty Subhawong,Hind Nassar,Nina Kouprina,Shahnaz Begum,Russell Vang,William H.Westra,Pedram Argani.The American Journal of Surgical Pathology.2009(2)

[4]Regulated Proteolysis of RAGE and AβPP as Possible Link Between Type 2 Diabetes Mellitus and Alzheimer’s Disease[J].Angelika Bierhaus.Journal of Alzheimer’s Disease.2009(4)

[5]热娣.特异性靶向晚期糖基化终产物受体（RAGE）的siRNA降低人类乳腺癌增殖研究[D].中南大学,2013.