一氧化氮合成酶-1抗体(神经型)的应用

背景^[1-3]

一氧化氮合成酶-1抗体(神经型)是可以特异性结合一氧化氮合成酶-1的一类多克隆抗体，主要用于检测一氧化氮合成酶-1的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

检测原理：双抗体夹心法测定标本中一氧化氮合成酶-1水平。用纯化的一氧化氮合成酶-1抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入一氧化氮合成酶-1，再与HRP标记的一氧化氮合成酶-1抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的一氧化氮合成酶-1呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中一氧化氮合成酶-1浓度。

一氧化氮合酶（NOS）是一种同工酶，分别存在于内皮细胞、巨噬细胞、神经吞噬细胞及神经细胞中。一氧化氮合酶存在于神经元中，在不同脑区呈选择性分布。因为一氧化氮很不稳定，因而研究生成一氧化氮的酶似乎更容易些，特别是一氧化氮合酶拮抗剂的发现，大大促进了一些一氧化氮功能的研究。

一氧化氮合酶属于神经系统，其同功酶有三种亚型，即在正常状态下表达的神经元型一氧化氮合酶（nNOS）和内皮型一氧化氮合酶（eNOS）以及在损伤后诱导表达的诱导型一氧化氮合酶（iNOS）。来源于诱导型一氧化氮合酶和神经元型一氧化氮合酶的一氧化氮有神经毒性作用，来源于内皮型一氧化氮合酶的一氧化氮有神经保护作用。

应用^[4][5]

用于载脂蛋白E与蛛网膜下腔出血后脑组织中内皮型一氧化氮合成酶表达的关系研究

载脂蛋白E（apolipoprotein E,apoE）与蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage，SAH）后脑组织中内皮型一氧化氮合酶（endothclialnitric oxide synthase，eNOS）表达的相关性，为临床防治SAH后脑血管痉挛提供新的治疗思路。

方法采用枕大池注血法构建小鼠蛛网膜下腔出血模型；将30只apoE基因敲除（apoE KO）鼠和30只apoE基因野生（apoE WT）鼠均随机抽签分为对照组、蛛血组、干预组（n=10）；对照组为枕大池注射40ul的生理盐水，蛛血组为枕大池注射40ul自体尾动脉血，干预组为在枕大池注血前6周，每天胃内灌注促进apoE蛋白表达的肝X受体激动剂T090131710mg/(kg.d)；

RT-PCR和Western blot法分别检测术后12h各组脑组织中eNOS的mRNA和蛋白表达情况。结果对照组apoE KO鼠及apoE WT鼠eNOS的mRNA[(0.811±0.015)vs(0.823±0.021)]和蛋白[(0.902±0.038)vs(0.875±0.041)]之间的表达无明显差异（P＞0.05）；与对照组相比，蛛血组eNOS的mRNA和蛋白表达明显降低，且蛛血组内apoE KO鼠eNOS的mRNA[(0.411±0.022)vs(0.613±0.036)]和蛋白[(0.578±0.061)vs(0.694±0.026)]表达较apoE WT鼠降低（P＜0.05）；

与apoE WT蛛血组相比，apoE WT干预组eNOS的mRNA[(0.766±0.052)vs(0.613±0.036)]和蛋白[(0.775±0.062)vs(0.694±0.026)]表达明显增加（P＜0.05），但apoE KO干预组eNOS的表达与apoE KO蛛血组相比无明显差异（P＞0.05）。

结论apoE与SAH后脑组织中eNOS的表达具有相关性；增加脑组织中apoE的表达能明显促进eNOS的表达增加，对防治SAH后脑血管痉挛的发生具有重要意义。

参考文献

[1]Subarachnoid hemorrhage[J].Alejandro A.Rabinstein.Neurology.2013(5)

[2]The Relationship Between Rebleeding After Spontaneous SAH and APOE Polymorphisms in a Chinese Population[J].Cheng Yin,Jian Ruan,Li Jiang,Shuai Zhou,Xiaochuan Sun.International Journal of Neuroscience.2012(8)

[3]Proteomic Biomarker Discovery in Cerebrospinal Fluid for Cerebral Vasospasm Following Subarachnoid Hemorrhage[J].Shivanand P.Lad,Harald Hegen,Gaurav Gupta,Florian Deisenhammer,Gary K.Steinberg.Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases.2012(1)

[4]Mechanical injured neurons stimulate astrocytes to express apolipoprotein E through ERK pathway[J].Cheng Yin,Shuai Zhou,Li Jiang,Xiaochuan Sun.Neuroscience Letters.2012(1)

[5]曾春.载脂蛋白E与蛛网膜下腔出血后脑组织中内皮型一氧化氮合成酶表达的关系研究[D].重庆医科大学,2013.