MKN-45人胃癌细胞说明及培养

介绍^[1]

MKN-45人胃癌细胞系由S Akiyama建立，源于一位35岁患有印戒细胞癌的女性的胃淋巴结。该细胞引种自DSMZ ACC-409。

细胞传代^[1]

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm² 培养瓶中的培养液，用PBS 清洗细胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml 完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml 离心管中，1000rpm 离心5min；

3）弃上清，沉淀细胞用1-2ml 完全培养基重悬，然后按1:2 比例进行分瓶传代，最后放入37℃，5%CO₂ 细胞培养箱中培养；

细胞冻存^[1]

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2 培养瓶中的培养液，用PBS 清洗细胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml 离心管中，1000rpm 离心5min；

3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；

4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h 后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。

细胞复苏^[1]

1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；

2）将冻存管中的细胞移至含6ml 完全培养基的15ml 离心管中， 1000rpm 离心5min；

3）弃上清，沉淀用6ml 完全培养基重悬，接种25cm2 培养瓶，于37℃，5%CO₂ 细胞培养箱中培养；

主要参考文献

[1]王彩莲 陈宝安 余卫平 高峰 宋萍；多西紫杉醇对人胃癌细胞株MKN-45的抑制及诱导凋亡作用的研究。《东南大学学报：医学版》2006年 第4期。